线立体DNA的快速制备

 线立体DNA是染色体遗传物质，哺乳类动物的线立体DNA为共价闭合环的环状DNA。它变异快、结构相对简单，经母系遗传，对真核生物基因组的结构、复制、转录、调控机理等方面都起着重要作用。近年来被广泛用于近缘种间或种内种群间亲缘关系的研究。
线立体DNA最早是用氯化铯梯度离心方法获得，该法提取的线立体DNA纯度高，但所需 仪器 设备昂贵，实验周期长，限制其在群体遗传研究中的应用。继而出现了酚抽提加酶解、碱裂解加柱层析等方法。
操作方法：

1. 取50mg新鲜小鼠肝组织，加1ml冷匀浆液，用玻璃匀浆器匀浆，随即以1,000g×3min， 4℃，离心。弃沉淀。
2. 取上清，12,000g×10min，4℃，离心，沉淀即为粗线立体。
3. 将沉淀溶于100ml（50mmol/L葡萄糖、10mmol/L Na ₂ EDTA ，25mmol/L Tris -HCl pH8.0）溶液中，充分混匀。
4. 加200ml新鲜配制的（1% SDS ，0.2N NaOH）溶液，轻轻摇匀，冰浴5min。
5. 再加150ml（3M NaAc pH4.8）溶液，轻轻摇匀，冰浴5min。12,000g×10min，4℃，离心。
6. 取上清加等体积（酚、氯仿、已戊醇之体积比为24:24:1）溶液，抽提2~4次，界面无白色物质。10,000g×5min离心。
7. 取上清加2倍体积95%乙醇，室温静置15min，然后12,000g×10min离心。
8. 弃上清，沉淀用75%乙醇洗涤1次，以12,000g×5min离心。
9. 弃上清，取沉淀，真空干燥后即得线立体DNA。将其溶于适量的TE 缓冲液 中，－20℃保存。