糖链的序列测定—高碘酸氧化法
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【实验原理】
高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处，生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行，每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量，可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。
【实验材料】
1. 实验器材
紫外分光光度计。
2. 实验
试剂
(1)溴甲酚蓝指示剂:0.1克溴甲酚蓝溶于250ml蒸馏水中（含1.43毫升0.1mol/L氢氧化钠）。
(2) 30mmol/L高碘酸钠溶液。
(3) 乙二醇。
(4) 0.01mol/L氢氧化钠溶液。
【实验操作】
1. 制作标准曲线：
取6支干燥
试管
，按下表操作
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管号 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
高碘酸钠（ml） |
0 |
0.5 |
1.0 |
1.5 |
2.0 |
4.0 |
|
蒸馏 水（ml） |
4.0 |
3.5 |
3.0 |
2.5 |
2.0 |
0 |
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各取0.1 ml，定容至25 ml，在223nm处测定光密度 |
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A 223 |
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横坐标为高碘酸钠毫摩尔数，纵坐标为光密度值，绘制标准曲线。
2. 样品测定
称取多糖样品25mg，用少量水溶解，加入30mmol/L高碘酸钠溶液,定容至25ml，置于暗处,室温下进行反应，于0，6，12，24，36，48…小时间隔取样0.1 ml，
蒸馏
水稀释250倍后，使用紫外
分光光度计
在223nm处测定光密度。至光密度值达一稳定值时，加乙二醇破坏过量的高碘酸以终止反应。由此光密度值根据标准曲线计算出高碘酸的消耗量。取2ml上述反应溶液，测定甲酸的生成量。剩余部分进行Smith降解。
3. 甲酸测定：
取2ml上述反应溶液，加一滴溴甲酚蓝作指示剂，用0.01mol/L氢氧化钠溶液滴定甲酸的释放量。
【注意事项】
为避免发生超氧化，反应溶液的pH值应控制在3~5，而且一定要在低温、避光处进行
