分配层析

常用吸附层析分离法易溶于有机溶剂而难于水的混合物。可电离的水溶 性混合物最适宜用离子交换层析法分离。分配层析法界于二者之间，在水和 有机溶剂中都可溶的混合物用分配层析法易分离。
当把一种物质在两种不混溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀的 分配。达到平衡时，这种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数，也就是 所谓的分配系数（a）。
分配层析法实际上是一种连续抽提法。在这里，一种溶剂通常是被结合 在固定的惰性支持物（柱或膜）上的水，另外一相由流动的被水饱和的有机 溶剂构成，它流过固定相，如果某一混合物的各组分在这两相中的分配系数 有足够的差异，它们就可以被分离。
1、纸层分析的理论Consden，Gordom 和Martin 首先用滤纸作支持物 并以茚三酮为灵敏显色剂，建立了微量而简便的分离蛋白质水解液中氨基酸 的方法。不久又发现除了氨基酸外，糖、核苷酸、甾体激素、维生素、抗生 素等很多物质都能用纸上层析法分离，因而纸层析成为 生物 化学工作中一种 常用的分离分析方法。
滤纸是理想的支持介质。在纸上，水被吸附在纤维素的纤维之间形成固 定相。由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易 扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。当有机相沿 纸流动经过层析点时，层析点上溶剂就在水相和有机相之间进行分配，且部 分溶质离开原点随有机相移动而进入水相。当有机相不断流动时，溶质就沿 着有机相流动的方向移动，不断进行分配。溶质中各组分的分配系数不同， 移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从样品的一端 经毛细作用流到纸的另一端。等纸干后，可用适当的显色方法使混合物中各 组分在纸上的位置显示出来，物质移动的距离与溶剂移动距离之比就是Rf 值。某一种物质在特定的溶剂系统、纸、展层方式、温度、pH 等条件下的 Rf 值基本上是常数。
如果固定相不完全是惰性的，那么既发生分配，又有吸附作用和可能的 离子交换，Rf 和a 的关系等式就会有例外。