动脉粥样硬化患者VSMC的提取
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实验材料:
眼科剪刀1把 眼科镊子2把 1×PBS约200ml M199培养液 离心机 5ml小皿 10ml大皿
实验步骤:
1、在超净台内用10ml的离心管分装5ml的1×PBS(已高压灭菌)。
2、手术台上取患者发生动脉粥样硬化改变的病变动脉,分放入准备好的PBS中,拿回实验室在超净台中,无菌条件下剥去外膜,用手术刀片刮去内膜,留下中膜并将其剪成1×1mm大小组织块。
3、消化法:PBS清洗组织块后并将其转移入10ml的离心管,加入0.125%胰酶消化37℃30分钟,室温吹打100分钟或者振荡器振荡100分钟,待组织块变小且消化液变粘时,收集消化液配平以1500转/分钟离心10分钟后,收集细胞种植于预先加入M199培养液的5ml小皿中放入37度5%CO2的培养箱中。
4、贴块法:PBS清洗组织块后移入已准备好的10ml大皿中,块间距为0.5cm,放入37度5%CO2的培养箱中,3小时后,待组织块贴壁后,再加入2ml培养液后放回37度5%CO2的培养箱中。
注意:最后加入2ml培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下,勿使组织块吹下。
5、随后每3天予以半量换液。
6、一周后可见组织块周围有细胞爬出,大约3周后80%融合。