丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通
点赞
收藏
wx-share
分享

幽门螺杆菌的基因诊断

互联网

1130
<font>幽门螺杆菌的基因诊断   早在19世纪未,就有注意到胃粘膜组织中存在一种螺旋形微生物,其后陆续有类似的报道,但均未引起人们的足够重视.1983年,澳大利亚学者Wanen和Marshall报告,在人胃粘膜活检组织中分离出这种细菌,即幽门螺杆菌(HelicobacterPYlor;HP;原名幽门变曲菌CampylobacterPylor;CP),并认为该菌可能是慢性胃炎和消化性溃疡的病原菌.随后各国学者相继进行研究,欧洲九国成立了HP研究协作组,每年召开一次专题讨论会.美国、荷兰、加拿大、日本、等亦都主办过国际性专题讨论会.1990年在澳大利亚召开的第九届世界胃肠病学大会上,一个专题委员会对HP的研究现状进行了总结,基于HP研究后重大进展,产生了新的胃炎分类法--悉尼系统,我国于1985年开展HP的研究,   1987年在昆明召开的第三次全国消化系统病学术会议上有多篇HP的研究论文,随后逐渐形成了全国范围的研究高潮.有关HP是人类慢性胃炎的汉病因子,并与消化性溃疡和胃癌有密切关系已为大多数的摘要,抗HP感染治疗方案已成为HP相关疫病温床常用的治疗方案. 一、HP的流行病学与生物学特性.   HP是一种微需氧的草纸阴性细菌,在光钳下,约3μm长,0.5μm宽,呈轻度“S”形变曲,与常见的空肠/结肠变曲菌很相似,直接镜检中,有时在菌体周围可见有类似荚膜的不易着色的洗染区,大多数细菌具有位于细菌一端的鞭毛,长约3--5μm,2--6根不等.人的胃粘膜菌是HP的自然定植部位,在Barretl食管,Meekel憩定和直肠的胃粘膜化生区也检出HP,但在肠粘膜上皮未见HP定植.HP主要位于胃的粘液层,与上皮细胞紧密接触.通过钙红染色呈示,在细菌和上皮细胞之间有纤丝样结相连.有时,HP集中在细胞连接处的周围,乃致破坏细胞连接而强行深入细胞间隙,从而摄取更多的从组织中漏出的营养,如尿素等,HP的生化特征是具有高活性的尿素酶,分解尿素产生氨,这在环境中起了中和作用.HP还能通过一些特异性的解体因子,形成粘着样结构,而牢牢粘附在组织表面的某些细胞上,在退变的上皮细胞表面往往可观察到HP.   HP感染在世界各地都较为常见,但发展中国家经济,饮食已在较差的地区的感染率显得更高,尤其是儿童的染感率发达国家和发展中国家有较大的区别.据估算,全球大约有近50%的人口胃内有HP的定居,流行病学调整表明,HP的流行状况与慢性胃炎,胃十二指肠溃疡及胃癌有密切的评价关系,初次感染年龄较早的人群,胃癌的发病率也较高,人们已接受HP是慢性胃炎的主要病因.胃炎的发率与HP的感染率均随年龄的增长而增高,一见感染HP,多持续终生.在不同地区,不同种族,不同人群或同一人群的不同个体之间,HP的感染率差别很大,这与已生习惯和设备有关.   该菌的传播主要是人--人之间通过口--口途径.已有报道在家庭内通过密切接触可造成传播.另外,内镜检查也可传播HP.具有活力的螺旋形HP在河水中至少可存活一周,而球形的HP则可存活一年多,但后者无致病力. 二、HP的实验室诊断. <b>一)组织学检查方法:</b>   组织学检查主要依靠涂片或切片,在染色的基础上用光镜或荧光显微镜等进行肉眼观察,依据染色的形态进行结果判定,此方法的特是,直接廉价可判成标本细菌长期保存,有一定的灵活度,但在细菌量较少,治疗后情况下,易产生阴性结果,遇到在地形态相似的细菌及颗粒时,有可能被误诊为HP,有时,在外科切除的标本中,也有可能及颗粒因固定不好,细菌分解或形态不典型而难以,而造成假阴性结果. </font>

<font><b>二)尿素酶法:</b>   HP能定居在PH值很低的人胃粘膜的粘层之下,上皮细胞表面,迄今,该部位未见本地的细菌),就应因为它能分泌大量的活性很高的尿素酶,尿素酶对PH具有自身保护作用,它水解尿素,生成氨和二氧化碳,氨在HP菌体周围形成一层保护性“氨气”,对于抵御胃纹的杀菌作用具有重要的意义.因为,人体内能产生尿素酶的细菌很少,体内HP的感染活性也不太高,因此,检测尿素酶能基本上反应体内HP的感染状况,尤其是它简单、快速、兼价、易于推广、所以易为临床检验人员接复,但由于尿素酶活性的检测主要都是观察它对尿素的降解,产生氨,周围环境PH值升高作为依据的,因此,在HP数量较少时,易出现假阴性,并且会由于其他种类的细菌数量相对比例增大,有时也会出现假阳性,尤其是在治疗一段时间后,多种药物都会影响尿素酶的活性,造成假性结果. 三、免疫学方法   目前应用的主要免疫学方法为:免疫印迹技术和酶联免疫叭附试验(ELISA).这两种方法具有较高的特异性和敏感性,尤其是血清时可以作为操作标本,因而为非侵入性检测手段,易为病人接受,可进行大量标本的筛选实验,但由于HP寄生在胃粘膜外,对未几体的致解能力相对较弱,在早期感染细菌数较少的情况下,会出现一部分假阴性,非特异的主要反应会导致部分假阳性. 四、培养:   细菌培养结合生化鉴定也可以说是检测HP的“金标准”.但培养的成功与否取决于标本取材的部位、数量、时间等.HP的培养条件相对也较为复杂,培养周期亦较长,故细菌培养,较难作为常规性的检测手段. 五、基因诊断:   HP的基因诊断主要包括探针杂交法和PCR法.1992年前,由于对HP的基因结构了解不多,特异性区域较少,因而主要用标记的致探针杂交法来研究及检测HP.杂交法前几种方法更为敏感和特异,特别是对于细菌量较少的或在形态上难以确定的标本,杂交法显示出明显的优势.但杂交法操作较为复杂,难以对大批量标本进行研究.从1990年起陆续有人用PCR来检测HP,通过近几年的大量实践,PCR法在用于HP的研究A-检测中,显示出无比的优越性,它以快速、特异、敏感、直接,易于自动性,易于普及,检测范围广泛突出优点,成为研究与检测HP基因结构、变异,与相关疾病关系,等方法的权威性方法,并越来越复制全球的广范关注. ><br /> </font>

<center> <p> </p> </center>
上一篇:超(亚)临界流体色谱的制备拆分方法 下一篇:AluPCR:用重复序列引物
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序