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液相色谱柱的使用和保养

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色谱柱的平衡和使用
    反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇(或乙腈)/水互溶,由于色谱柱在运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱:如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用含水量很高(约95%)的流动相过渡,样品分析完后,冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗,对于非极性柱,如C8或C18,由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链,造成柱效下降。另外,分析样品时,由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜,出现样品不保留而分不开,重现性差,所以对于一般的C18或C8,有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。
    如何平衡色谱柱。
    平衡过程中,将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低,则需要较长的时间平衡)。
    色谱柱的再生
    建议用来冲洗的溶剂体积
    色谱柱规格 柱体积 溶剂体积
    150×4.6 2.50ml 50ml
    250×4.6 5.0ml 100ml
    250×10 20ml 400ml
    请根据下表选择您的再生方法:
    极性固定相(如Si,NH2,Diol色谱填料)的再生:正庚烷―氯仿―乙酸乙酯―丙酮―乙醇―水
    非极性固定相(如反向填料C18,C8等)的再生:水―乙腈―氯仿(或异丙醇)―乙腈―水
   
    色谱柱的维护
    1、使用保护柱
    2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5,尽可能在此范围内使用
    3、避免流动相组成及极性有剧烈变化
    4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理
    5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,要在实验完毕将柱子冲洗干净
    6、压力升高时更换保护柱
 
 

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