正相HPLC色谱柱的清洗、再生和维护方法

清洗步骤

　　1. 每次清洗都用低流速起步，当检测到柱压稳定在一定水平后再增加流速。

　　2. 先用10柱体积不含其它添加剂的流动相中的弱溶剂，如正己烷、氯仿等反冲色谱柱。

　　3. 再用20柱体积的诸如二氯甲烷或异丙醇等流动相中的强溶剂反冲色谱柱。

　　4. 100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉。如果异丙醇的清洗还不足以恢复色谱性能，则说明色谱柱柱床有塌陷和空洞了，用清洗的方法无法解决这个问题。色谱症状和清洗再生过后的色谱性能恢复情况往往能提供色谱柱真正存在问题的线索。

　　正相柱除水分

　　诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归因于固定相的变化，而填料可能还是完好的。在正相色谱中，固定相的水分含量常常是个影响选择性的关键参数。大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分(正己烷20摄氏度下水分含量是0.0111% w/w ), 正相色谱柱中水分含量随时间的不同是导致选择性变化的最普通的一个因素。

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用含2.5 % 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5 % 冰醋酸的正己烷冲洗色谱柱30个柱体积，可以去除色谱柱中水分并恢复色谱柱原来或所需要的选择性。

　　考虑到从流动相和色谱柱中完全去除水分非常困难，还有个尚有争议的简单方法可以采用。使用水分含量可控的流动相(譬如和水半饱和)以一直保持最初的方法选择性，而不需要每次进行冗长的除水分步骤。不管何种情况，最重要的都是保持水分条件的一致性。