近视康合剂的制备和质量控制

　　【摘要】  目的：建立近视康合剂质量的控制方法。方法：采用薄层色谱法对原儿茶醛和芍药苷进行定性鉴别，利用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶（4.6 mm×200 mm，5 μm）为固定相，以甲醇�1%冰醋酸（15∶85）为流动相，流速为1.0 mL/min,检测波长为281 nm，测定原儿茶醛的含量。结果：薄层色谱鉴别方法专属性强，原儿茶醛在6.20～62.00 μg/mL浓度范围与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为96.74%，RSD＝3.5%（n＝6）。结论：该方法简便、准确，具有实用性，可作为近视康合剂的质量控制标准。

　　【关键词】  近视康合剂；原儿茶醛；芍药苷；薄层色谱法；高效液相色谱法

　　近视康合剂是我院应用多年的纯中药复方制剂，由丹参、当归、白芍等十二味中药组成，具有养血活血、疏肝健脾、升阳明目的作用。用于假性近视及弱视的恢复治疗，疗效显著，不良反应少。方中丹参为君药，它的活性成分有脂溶性菲醌类衍生物和水溶性酚酸类，水溶性酚酸类成分包括原儿茶醛、丹参素、原儿茶酸、丹酚酸A、B、C等。丹参制剂的质量控制标准不尽统一［1�7］。近视康合剂起主要药理作用的是其水溶性成分，其中原儿茶醛是代表酚酸类的主要成分，抗血小板聚集、清除氧自由基等作用较菲醌类衍生物更强。为了临床用药准确有效，更有效的控制其质量，我们采用TLC对近视康合剂中原儿茶醛和芍药苷进行定性鉴别，用高效液相色谱法测定原儿茶醛的含量，为该制剂提供较完善的质量控制方法。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器

　　AgilentL 100高效液相色谱议（G1311A四元泵，G131A自动进样器，G131A柱温箱，G1311A检测器，Chemstations工作站），BS210S型电子天平（德国赛多利斯股份公司）。

　　1.2  试药

　　原儿茶醛对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇为色谱纯（天津科密欧化学试剂有限公司），水为重蒸馏水，近视康合剂（自制，其中药材经鉴定均符合2005年版《中国药典》各品种项下标准），其它试剂均为分析纯。

　　2  处方与制备

　　2.1  处方

　　丹参、当归、党参、白术、枸杞子、锁阳、柴胡、菊花、石决明、甘草、白药、茯苓。

　　2.2  制备工艺

　　将丹参、当归、白芍等十二味中药，加水浸泡20 min后（石决明包煎），加水煎煮2次，第一次2h，第二次1.5h，合并煎液，过滤，滤液浓缩至约800mL，离心，取上清液，加羟苯乙酯0.4 g（用少量药用酒精溶解）及甜菊糖苷（食用）0.5 g（用少量纯化水溶解），加纯化水制成约1 000 mL，搅匀，分装，流通蒸气灭菌30 min即得。

　　3  质量控制

　　3.1  薄层鉴别

　　3.1.1  丹参的TLC［8］  取本品30 mL，加盐酸1 mL，加热回流30 min，放冷，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使其溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。参照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿�丙酮�甲酸（8∶1∶1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以2%铁氰化钾溶液与1%三氯化铁溶液（1∶1）的混合液显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

　　3.1.2  白芍的TLC［9］  取本品30 mL，加以水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次25 mL，合并正丁醇液，在水浴上蒸至近干，加中性氧化铝1 g，拌匀，蒸干，加于已处理好的中性氧化铝柱（直径1.5 cm；1 g）上，用乙醇�乙酸乙酯（1∶1）混合溶液20 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取芍药苷对照品适量，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μL，对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿�乙酸乙酯�甲醇�甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

　　3.2  近视康合剂中原儿茶醛的含量测定

　　3.2.1  色谱条件  色谱柱：HypersiL ODS2（4.6 mm×200 mm，5 μm）柱，柱温35 ℃；流动相：甲醇�1%冰醋酸（15∶85）；流速：1.0 mL/min，检测波长281 nm；进样量10 μL；定量方法为外标法，理论塔板数按原儿茶醛计算应不低于2 000。

　　3.3.2  对照品溶液的制备  精取原儿茶醛对照品适量加50％甲醇适量配成310.00 μg/mL作贮备液。

　　3.3.3  供试品溶液的制备  精取本品1 mL置具塞磨口离心管中，精密加入50%甲醇4 mL，混匀，离心，静置片刻，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

　　3.3.4  阴性对照液的制备  取除丹参外的其它处方量药材，按制备工艺制成缺丹参的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照液。

　　3.3.5  空白干扰试验  取阴性对照液、对照品溶液、样品溶液分别进样10 μL，按上述色谱条件进行测定。色谱图表明：原儿茶醛峰与其它组分分离完全，其保留时间约为6.3 min，阴性样品不干扰测定，见图1。

　　图1  HPLC色谱图(1�原儿茶醛)（略）

　　A. 原儿茶醛对照品；B. 阴性对照；C. 近视康合剂

　　3.3.6  线性关系考察  精密吸取原儿茶醛对照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、2.0 mL分别置于10 mL量瓶中，以50%甲醇稀释至刻度，得到浓度为6.20、12.40、24.80、37.20、62.00 μg/mL的对照品溶液，按上述色谱条件进样10 μL测定，以测得原儿茶醛峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标绘制成标准曲线，求得回归方程为A＝33.3520C＋23.7212（r＝0.9996），原儿茶醛在6.20～62.00 μg/mL的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　3.3.7  精密度试验  精取对照品溶液24.80 μg/mL，按上述色谱条件测定，进样5次，每次10 μL，测定峰面积积分值RSD＝1.0%，结果表明精密度良好。

　　3.3.8  重复性试验  取同一批号（061025）供试品5份，分别按“3.3.3”项供试品溶液制备处理，在上述色谱条件下分析测定，其峰面积积分值RSD＝0.82％，结果表明重复性良好。

　　3.3.9  稳定性试验  取供试品溶液，分别于0、2、5、10、20 h进行测定，记录峰面积，RSD＝1.2％，表明供试品溶液在20 h内稳定。

　　3.3.10  加样回收率试验  取已知含量的样品（061025）1.0 mL分别添加原儿茶醛对照品，按供试品溶液制备项下制备并测定含量，计算回收率。结果见表1。

　　3.3.11  样品测定  取3批样品均按“3.3.3”供试品溶液制备后，在上述的色谱条件下，测定每一供试品，重复测定3次，结果见表2。

　　表1  回收率试验结果（n＝6）（略）

　　表2  样品测定结果（略）

　　4  讨论

　　原儿茶醛为弱酸性物质，在中性流动相中存在着离解平衡，拖尾现象严重，所以以甲醇�1%冰醋酸（15∶85）作为流动相［10］，能改善其色谱行为，使原儿茶醛与其它物质较好分离。丹参饮片因来源不同，其所含有效成分的量存在一定差异，并且由于工艺过程不同也带来成分的损失［11�13］。因此，选择丹参饮片时应严把质量关。通过实验，建议近视康合剂的质量控制标准以原儿茶醛的含量为不少于80.00 μg/mL为内控标准。本制剂采用水煎煮及真空浓缩而成，丹参为方中君药，药典只对丹参酮ⅡA和丹酚酸B进行了含量测定［14］，但考虑丹参酮类成分为脂溶性成分且对光、热敏感，易分解变质，故没有对丹参酮ⅡA和丹酚酸B进行分析。原儿茶醛为丹参主要水溶性有效成分，性质比较稳定，因此，我们以原儿茶醛的薄层鉴别为定性，采用HPLC测定其含量，以它们为指标来控制成品的内在质量，为药品生产提供了更可靠的质控方法。

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