栽培和野生竹节参中人参皂苷含量比较

　　摘要：目的对野生和栽培竹节参中所含人参皂苷及其含量进行比较。方法参照人参的分析方法，以人参皂苷 Rg1、 Re为对照品，对野生和栽培竹节参进行 TLC鉴别比较，用发HPLC法进行定量分析。结果在选定的薄层条件下，对照品与供试品的薄层图谱清晰，分离度好，栽培和野生竹节参具有相同的斑点; 对照品在0.48～2.40 μg范围内具有良好的线性关系，回归方程为：Y= 336 182X-302 41,  r=0.999 8。结论根据测定和比较的结果，栽培和野生竹节参所含人参皂苷类成分基本相似，野生竹节参根茎中人参皂苷 Rg1、 Re的含量较高。

　　关键词：竹节参；  人参皂苷Rg1、 Re；  薄层色谱；  高效液相色谱

　　竹节参为五加科植物竹节参 Panax japonicus C.A. Mey的干燥根茎。主产于云南、四川、贵州、陕西及湖北等省。竹节参含人参皂苷，具有滋阴补肾，散淤止痛，止血祛痰的功效［1］。其药材原来主要来自野生，但资源有限，因此在湖北恩施、建始、宣恩、鹤峰等地已开始栽培。由于栽培品与野生品生长环境不尽相同，栽培品成长较快、两者在化学成分上可能存在差异。为此，我们对栽培的竹节参与野生竹节参所含的人参总皂苷进行了比较，现报道如下。

　　1  仪器与材料

　　1.1   仪器Waters 510液相色谱仪；U6K进样器；Waters486紫外检测器；Waters 746数据处理仪；METTLER TOLEDO AL204型万分之一电子天平。

　　1.2   试剂乙腈为光谱纯，重蒸水，磷酸及其他试剂均为分析纯。

　　1.3   对照品人参皂苷 Rg1、 Re由中国药品生物制品检定所提供。

　　1.4   样品野生竹节参，栽培竹节参（分别种植于海拔1 560 m和950 m），分别采自湖北恩施自治州建始县和恩施市，经湖北民族学院张万福教授鉴定为五加科植物竹节参Panax japonicus C.A. Mey的干燥根茎。

　　2  方法与结果

　　2.1   薄层色谱鉴别参照人参薄层色谱鉴别法［2］，取以上3种药材样品，将其下部根与根茎分开，碾成粗粉，各取约1.0 g，精密称定，置50 ml圆底烧瓶中，加氯仿40 ml 加热回流1 h，弃去氯仿液，药渣挥干溶剂，加水0.5 ml拌匀湿润后,加水饱和的正丁醇10 ml，超声处理30 min，吸取上清液，加3倍量氨试液,摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。取人参皂苷Rg1、 Re对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述8种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以正丁醇醋酸乙酯水（4∶1∶5）上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的紫红色斑点。结果见图1。

　　2.2  含量测定 参照人参中人参皂苷 Re与人参皂苷Rg1的含量测定进行［2］。

　　1.高海拔栽培竹节参根茎   2. 低海拔栽培竹节参根茎 3. 野生竹节参根茎   4.高海拔栽培竹节参根   5.低海拔栽培竹节参根    6. 野生竹节参根   7. 人参皂苷Rg1对照品   8.人参皂苷Re对照品

　　图1  竹节参根茎和根人参皂苷薄层色谱图（略）

　　2.2.1  色谱条件  色谱柱：250 mm×4.6 mm不锈钢柱，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶（5 μm）。流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（25∶75）。检测波长：203 nm；柱温：30℃。流速1.0 ml?min-1。

　　2.2.2  对照品溶液的制备  因人参皂苷 Re与人参皂苷 Rg1出峰时间相同。在配制对照品溶液时各精密称定1.2 mg用甲醇溶解，定容至10 ml，即得0.24 mg/ml的对照品溶液。

　　2.2.3  供试品溶液制备 分别取上述野生竹节参和栽培竹节参（海拔1 560 m）的根和根茎药材粗粉1.0 g，精密称定，按《中国药典》2000年版人参含量测定法制备供试品溶液。

　　2.2.4  线性关系考察  精密吸取浓度为0.24 mg/ml的人参皂苷Rg1、 Re的对照品溶液2，4，6，8，10 μl，分别注入色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标(X)，计算得回归方程 Y= 336 182X-30 241，  r=0.999 8。结果表明，进样量在 0.48～2.40 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.2.5  精密度实验  精密吸取同一浓度的对照品溶液，按上述色谱条件测定，重复进样5次，测定峰面积,，RSD=0.76%，表明精密度良好。

　　2.2.6  稳定性实验   分别精密吸取同一份对照品溶液，分别于配制0，2，4，8，12，24 h进样，记录峰面积积分值，RSD=1.46%，结果表明，供试品溶液在24 h内基本稳定。

　　2.2.7   回收率实验  精密吸取野生竹节参根茎供试品溶液，加入精密称定的人参皂苷 Re与人参皂苷 Rg1对照品，依法测定，回收率=98.47%，RSD=2.44%。

　　2.2.8  样品测定  竹节参（野生）供试品溶液和人参皂苷对照品溶液的色谱图（见图2），取4种药材供试品溶液分别进行测定,其其相应位置人参皂苷的含量，结果见表1。

　　a.人参皂苷对照品    b.竹节参根茎（野生）

　　图2  竹节参（野生）和人参皂苷 Re+Rg1 HPLC色谱图（略）

　　表1  栽培和野生竹节参中以人参皂苷（Re+Rg1）为对照品测定的含量（略）

　　3  小结

　　从薄层图谱可见栽培品与野生品都有对应的5个主要的薄层色谱斑点,说明其所含主要成分基本相似。从 HPLC含量测定结果来看，野生竹节参根茎中人参皂苷 Rg1、 Re的含量远高于栽培品， 但野生竹节参的根的含量仅略高于栽培品。由于野生竹节参的药用部位的根茎占绝大部分，从该结果可以看出，野生竹节参质量较优，其原因，可能与野生品生长年限较长有关。该野生样本生长期在10年以上（10年以内的苗小，一般不采），栽培品均为5年生。栽培品虽然 Rg1、 Re的含量较低，但生长时间较短，可以不受资源限制，并能保护珍贵的野生资源，同时，从薄层色谱可以看出，栽培品根茎中其它皂苷（除Rg1， Re）的含量也仅仅略低于野生品，因此，栽培竹节参仍然有较大优势，对栽培品的作用值得进一步研究和探讨。

　　参考文献：

　　［1］  郑宏钧，詹亚华，张荒生，等.现代中药材鉴别手册［M］.北京：中国医药科技出版社，2001：182.

　　［2］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：6.

　　基金项目：湖北省教育厅重点科研 B类项目（No.2004X090）

　　(湖北中医学院，湖北 武汉  430061；  湖北民族学院附属医院，湖北 恩施  445000)