柱色谱

    （一）原理及基本装置

    液相色谱中的柱色谱法又称柱层析法，既可以用比较复杂的装置，也可以用简单的设备。用一根适宜的柱子，一个洗脱装置，一个流量控制装置（蠕动泵），一个紫外检测仪和一个部分收集器就可以构成最基本的分离装置。色谱柱是整个过程的心脏，在使用时必须满足下述要求:

　(1)柱底应有一凝胶的支持层，该支持层应保证溶液能从柱中自由流出。

　(2)支持层下面的死体积要尽可能小。

　(3)柱子的出口应有一个合适的接头与检测器和部分收集器相连。

　(4)以玻璃管和塑料管较好。柱子的基本结构如图 6�1
 
　早期，通过柱子的液体以重力输入为主，这时柱子入口高于出口，以产生静的水压差。但在洗脱期间，贮液容器中洗脱液液面的下降会降低流体压力，从而也降低了洗脱液通过柱子的流速。目前多使用蠕动泵来输送洗脱液（如图 6�1）。蠕动泵可以产生一个稳定的液体流速而被广泛地使用，它可以用于上样品，输送缓冲液，产生梯度洗脱方式。分离生物大分子时，液体流出后要尽快地进行检测，一般使用紫外检测仪。生物大分子一般在28Onm进行连续的检测(Trp+Tyr)或者在更灵敏的220或205nm(肽带)波长进行检测，最后使用收集器收集所需的组分。