血涂片的制备-检验基础

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将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载玻片上，经染色后在显微镜下检查，这是血细胞形态学检查的基本方法，临床应用很广，特别是对各种血液病的形态学诊断很有价值。但是，如果血徐片制备不良，染色不佳，常使血细胞的形态学鉴别和诊断发生困难，甚至导致错误的结论。如血膜过厚，细胞重叠缩小；血膜太薄，白细胞多集中于边缘。因此，制备厚薄适宜、分布均匀的血涂片是血液学检验的基本技术之一。

一、载玻片的清洁

新载玻片上常有游离碱质，必须用约lmol／LHCI浸泡24h后，再用清水彻底冲洗，干燥备用。用过的载玻片可放入含适量肥皂或合成洗涤剂的清水中煮沸20min，再用热水将肥皂和血膜洗净，用清水反复冲洗，干燥备用。如急用载玻片，可将其置0、9乙醇中浸泡lh，用蒸馏水洗净后，擦干或烘干备用。使用载玻片时，只能手持玻片边缘，切勿用手触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。

二、制作血涂片的标本

血涂片既可由非抗凝的静脉血和毛细血管血制备，也可由EDTA抗凝血制备。EDTA抗凝血中，钙离子被螫合后，能阻止血小板聚集，推片时血小板均匀平铺，显微镜下易于对血小板进行观察评价。但有时可观察到因EDTA引起的红细胞皱缩及白细胞丛集现象。但随着血液分析仪的逐步普及，血标本多为EDTA抗凝血，除作全血细细胞计数及多参数分析外，制备血涂片也非常方便，虽有上述弊端，但显微镜下易于发现。

三、血涂片的制备

血涂片的制备方法很多，如手工推片法、自动推片法、载（盖）玻片压拉法、旋转涂片法、棕黄层（buffy－coat）涂片法及厚血膜涂片法等，现介绍如下。

1、手工推片法 取血标本一滴置载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持25～30o的平面夹角，平稳地将血向前推动，血液即在载玻片上形成一薄层血膜。将制成的血膜在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞皱缩。

一张良好的涂片，要求厚薄适宜，头体尾分明，边缘整齐，两侧应留有空隙。玻片的一端应留有贴标签的地方。涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度、推片时的速度有关。血滴大、角度大、速度快，则血膜厚；反之则血膜薄。血膜分布不匀，主要是推片边缘不齐、用力不匀或载玻片不清洁所致。

2、载玻片压拉法 取两张贴有标签的载玻片备用，将血液滴于一张载玻片的近中央处，立即将另一载玻片于之贴合，四角对齐，标签一端一个，使贴合后的玻片间留下如标签一样厚的间距。先将血滴沿纵向轻压展开，再将两玻片横向均匀拉开，得到两张血膜。此法最适用于血细胞的活体染色，预先将染料滴加在玻片上，干燥后备用。涂制时先将血液与染料混染一段时间，再按上述方法制成血涂片，显微镜下检查，如网织红细胞的检验。

3、旋转器涂片法 旋转涂片器的基本结构是：在与电动机转轴垂直的方向装一水平转盘，正中夹置载玻片。徐制时将血标本滴加在载玻片的中央，开动旋转涂片机，在规定的时间内即可制备一张良好的血涂片。对该仪器的要求应具有低惯性高转矩，开动时能立即加速（5000r／min），关机时能迅速停止（O、25s内）。使用这种仪器涂片，白细胞及红细胞能均匀分布在玻片上，且形态保持完好。

4、棕黄层涂片法为了获得较多的有核细胞，使用离心的方法，将EDTA抗凝血作分层离心（RCF—2260g，5min），取红细胞层上的棕黄层（有核细胞和血小板集中层，）作标本，用手工推制成涂片供检查用。

5、厚血膜涂片法从指尖或耳垂取血1滴（约20ul）于载玻片中央，用推片的一角将血由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1、5cm的圆形血膜，自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白。倾去水后血膜呈灰白色，干后染色镜检。厚血膜片因取血量多，待检成分较集中，因此特别适合于疟原虫、丝虫的微丝蚴等的检查。