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热原检查 实验指导

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7306

 药理学实验

 热原检查

 

【目的】
学习热原测试方法(家兔法)和热原反应的判断标准

【原理】热原又称致热原,主要来自细菌的代谢产物。中草药含有有利于细菌生长繁殖的淀粉、糖、蛋白质等成分,如果在提取过程中在空气中暴露的时间过长,则容易被细菌污染而产生热原。我国药典规定的热原检查法系将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内,在规定时间内,观察家兔体温升高的情况,以决定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

【器材】 兔子固定箱,肛门 温度计 ,20或30毫升注射器,针头,镊子,酒精棉球。

【药品】 5%葡萄糖盐水注射液

【动物】 家兔

【方法】 按《中华人民共和国药典》2005年版附录66页进行。

1.试验前准备
(1)实验前1~2日将实验家兔放在同一温度的坏境中;
(2)实验室和饲养室的温差不得>5℃;
(3)室温:17~25℃,在实验过程中室温变化不得>3℃;
(4)实验前至少1小时开始停止给食,并置于适宜的装置中;
(5)注射器、针头在250℃ 烘箱 中烘30min,也可用其他适宜的方法除去热原。

2.检查法 取健康、无伤、无孕的家兔3只(试验当日家兔停食2小时)。
(1)注射前测体温(T),测2次(间隔30min)。△T(温差)≤0.2℃。
动物要求:供试用的家兔应健康合格,体重=1.7~3.0kg,雌兔应无孕。T38.0~39.6。
(2)必须在测定正常体温后15min内,自耳缘i.v缓缓注入规定量并温热至约38℃的5% G.S溶液 10ml/kg。
(3)测T值6次(间隔30min),以6次中最高的一次T减去正常的平均T,即为该兔体温的升高温度(℃)。

【结果 】 填入表 12。

12 热原检查结果

检查日期

 

 

检查者

 

检品名称

 

 

 

兔 号

1

2

3

4

5

 

 

 

 

 

体 重

 

 

 

 

 

第一次T

 

 

 

 

 

第二次T

 

 

 

 

 

平均T

 

 

 

 

 

注射供试品时间

 

 

 

 

 

第一次 T

 

 

 

 

 

第二次T

 

 

 

 

 

第三次T

 

 

 

 

 

第四次 T

 

 

 

 

 

第五次T

 

 

 

 

 

第六次T

 

 

 

 

 

注射前后△ T

 

 

 

 

 

检查结论

 

 

 

 

 

【结果判断

如3只家兔中有1只T升高0.6℃或>0.6℃,或3只空兔T升高均<0.6℃,但3只家兔的T升高总和达1.4℃或>1.4℃,应另取5只家兔复试。
合格:(1)在初试的3只家兔中,T升高均<0.6℃,并且3只家兔T升高总和<1.4℃;(2)或在复试的5只家兔中,T升高0.6℃或>0.6℃的家兔不超过1只,并且初试、复试合并8只家兔的T升高总和为3.5℃或<3.5℃,均判断为供试品的热原检查符合规定。
不合格:(1)在初试的3只家兔中,T升高0.6℃或>0.6℃的家兔超过1只;(2)或在复试的5只家兔中,T升高0.6℃或>0.6℃的家兔超过1只;(3)或初试、复试合并8只家兔的T升高总和>3.5℃,均判断为供试品的热原检查不符合规定。
当家兔升温为负值时,均以0℃计。

【结论】

【注意】
1.热原检查法是一种绝对方法,没有标准品同时进行实验比较,是以规定动物发热反应的程度来判断的。影响动物体温变化的因素又较多,因此必须严格按照要求的条件进行实验。
2.给家兔测温或注射药液时动作应轻柔,以免引起动物挣扎而使体温波动。测量家兔体温应使用精密度为±0.1℃的测温装置。测温时,在测温探头或肛温计上涂少许液体石蜡,轻轻插入肛门约6cm深,测温时间至少1.5min,每兔各次测温最好用同一体温计,且测温时间相同,以减少误差。
3.本实验记述的方法主要供教学实验之用,其他事项可参阅药典。

【思考题】
热原检查时对家兔有何要求?试验中须注意什么?

 

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