超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测的筛选与确证试验

互联网2015-01-05

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ESBLs是英文Extended-Spectrum β-lactamase的缩写，中文意思是超广谱β-内酰胺酶，它是当前抗生素出现的新的耐药趋势之一。
目前大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、肺炎克雷伯氏菌是最常见的产ESBLs菌株的细菌，其次，阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜绿假单孢菌也可出现产ESBLs菌株的细菌。
肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs检测的筛选与确证试验

方法

初步筛选试验

表型确证试验

培养基

Mueller-Hinton琼脂

抗微生物药

物纸片浓度

头孢泊肟　10μg　或

头孢他啶　30μg　或

氨曲南　　30μg　或

头孢噻肟　30μg　或

头孢曲松　30μg　

(使用一种以上的药物进行筛选将会提高检测的敏感性)

头孢他啶　　　　　　30μg

头孢他啶/克拉维酸　　30/10μg

和

头孢噻肟　　　　　　30μg

头孢噻肟/克拉维酸　　30/10μg

确证试验需要同时使用头孢噻肟和头孢他啶，单独和联合克拉维酸的复合制剂）

接种

按标准纸片扩散法的规定进行

孵育条件

孵育时间

判读结果

头孢泊肟的抑菌圈≤17mm

头孢他啶的抑菌圈≤22mm

氨曲南的抑菌圈　≤27mm

头孢噻肟的抑菌圈≤27mm

头孢曲松的抑菌圈≤25mm

提示可能有ESBLs的产生

2个药物中有任何一个，在加克拉维酸后，抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈相比，增大值≥5mm时，判定为产ESBLs（如，头孢他啶的抑菌圈＝16mm；头孢他啶/克拉维酸的抑菌圈＝21mm）

质控建议

大肠埃希菌ATCC25922（见表3的质控范围）

肺炎克雷伯菌ATCC700603：

　头孢泊肟抑菌圈9-16mm

头孢他啶抑菌圈10-18mm

氨曲南抑菌圈　9-17mm

头孢噻肟抑菌圈17-25mm

头孢曲松抑菌圈16-24mm

大肠埃希菌ATCC25922：所测试药物联合克拉维酸后的抑菌圈直径与单药抑菌圈相比，增大值≤2mm。

肺炎克雷伯菌ATCC700603：

头孢他啶/克拉维酸抑菌圈直径增大≥5mm；

头孢噻肟/克拉维酸抑菌圈直径增大≥3 mm。

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　脚注
a. 头孢他啶/克拉维酸(30/10μg)纸片与头孢噻肟/克拉维酸（30/10μg）纸片的制备：使用克拉维酸1000μg/ml的原液（新鲜制备或者从－70℃冰冻中取出已分装在小瓶中的），把10μl的克拉维酸加到头孢他啶（30μg）和头孢噻肟（30μg）的纸片上。在纸片贴于平板之前1个小时内，用微量加样器把10μl原液加到头孢他啶和头孢噻肟纸片上，允许有30分钟的时间以利于克拉维酸的吸收和纸片在贴之前保持足够的干燥。制备完成后立即使用纸片，否则丢弃；不能保存。（1）CAZ CAZ/棒酸，CTX CTX/棒酸。一种大于5MM，另一种小于5MM或相等，可确认为ESBL阳性。
（2）加棒酸的药片抑菌圈直径反而小于不加的，可能是片间差异，应认为ESBL阴性