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浅谈实验室细菌菌种的保存

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作者:张晓雷, 董小青, 王丹敏    作者单位:300162 天津,武警医学院微生物教研室

 

 

    在微生物学、环境科学、分子生物学、毒理学、酶学、疫苗制备、药品生产等等领域的实验过程中,都需要应用各种细菌,储备标准菌种、参考菌种、特殊菌种是必不可少的,下面就几种实验室菌株的保存方法简述如下。
    1  斜面低温保存法

 

 

    将分纯的待存菌接种于适宜的固体斜面培养基上,得到充分生长后,用封口膜封口,贴上标签,保存于4℃的冰箱中。此法操作简单、使用方便、不需要特殊设备,是实验室菌种保存最常用的方法。但保存时间短,一般每个月都要移种1次,而且菌种容易变异,所以此方法只适合实验室短期实验菌株的保存。

    2  半固体琼脂法

 

 

    用接种针将以分纯的待存菌,穿刺接种于半固体中,放入培养箱培养后取出,封上无菌的液体石蜡,贴上标签,放4℃冰箱保存。此方法简便易操作,不需特殊设备、技术难度不大,但保存的时间不长,一般只能保存1年以内,而且对抵抗力弱以及一些特殊菌种大概只能存活3~6个月,需要频繁的传代,这样很容易使菌株受到污染、变异。所以此方法不适用菌种的长期保存,只适合实验室一些要求不高的菌种的短期保存。

 

 

    3  液体石蜡保存法

    将液体石蜡灭菌,放于37℃恒温箱中,使水汽蒸发掉备用。再将已分纯的待存菌在最适宜的斜面培养基中培养,使得到健壮的菌体,用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡,注入已长好的斜面培养基上,用量以高出斜面1cm为准,将试管直立,贴上标签,置4℃下保存。此法制作简单,不需要特殊设备,菌种可以保存1年左右不需要经常移种,缺点是保存的时候需要直立放置。此方法适合实验室短期菌株的保存,而且保存时需要一定的空间[1]。

    4  高层半固体琼脂石蜡保存法

 

 

    将待存菌经平板划线分离后,挑单个菌落用接种针反复穿刺接种到高层半固体琼脂培养基中,经培养箱培养后取出,用灭菌过的液体石蜡滴加到半固体琼脂菌种管表层约0.5cm高度,贴上标签,存放4℃冰箱。此法操作简便,不需要特殊设备,效果好,可以保存菌株1~2年。所以适合实验室菌株的较长期的保存[2]。

    5  纸片法

    将已分纯的待存菌用无菌镊子镊取纸片,在纸片上刮取4~5个菌落,放入冻存管内,盖上盖子后用封口胶布封住边缘,贴上标签,放入冰箱冷冻保存(-20℃左右)。此方法具有操作简单、不需特殊设备、经济实用、保存空间小等,而且保存时间至少2年,但对一些营养要求比较高的菌种,存活率不理想。所以此方法适合实验室一些营养要求不高的菌种较长时间的保存[3]。

 

 

    6  甘油液保存法

    将已分纯的待存菌接种于肉汤中,37℃培养18~24h,然后按5份肉汤溶液、2份甘油-生理盐水保存液的比例分装于灭菌的微量离心管或细胞冻存管中,贴上标签,置-80℃~-20℃冰箱保存。此法操作简便,不需要特殊设备,效果好,可以保存菌种3年左右,无变异现象,而且此方法还可以保存一些要求较高的特殊菌种,适用范围广。所以此方法适合实验室普通菌种或特殊菌种的较长期的保存[4]。

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