【分享】可取代RT-PCR的QuantiGene?技术

丁香园2015-06-29

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Panomics公司的QuantiGene2.0 产品是基于Branched DNA（b-DNA）技术，完成核酸水平的精确定量检测。它克服了传统的real-time PCR（或者q-PCR）技术中的种种不确定因素，无需抽提纯化RNA，无需反转录，无需PCR扩增，对样本量下限无要求（只需mRNA拷贝数在检测范围内），只需将样本用特定裂解液裂解后，经探针杂交与信号放大即可迅速得到比real-time PCR更加精确的定量结果。除细胞、组织、样本外，该技术对血液样本与福尔马林浸泡、石蜡包埋切（FFPE）同样具有极高的精确度、准确性与重现性。 目前，该技术主要应用于3个平台： 1、QuantiGene® ViewRNA QuantiGene® ViewRNA技术是一套灵敏可靠，行之有效的新技术方案，它可以在原位水平上做到单个细胞单个拷贝数的mRNA或DNA的检测，并能观察同一群体中每个细胞基因的异质表达。据Zhang L等人的报道(Zhang L., Science, 276(5316):1268-1272,1997)，80%以上的mRNAs在一个细胞里的拷贝数不会超过5个，因此QuantiGene® ViewRNA为更好的理解表达水平低的基因所扮演的重要生物学角色提供了一个强有力的研究手段。 QuantiGene ViewRNA Assays的优点： ■ 灵敏度高，可做到单细胞单拷贝的检测 ■ 操作周期短，一天内可以完成 ■ 很好地保持了组织结构和细胞形态 ■ 相对于不易获取抗体的免疫组化和免疫荧光实验，实验周期更短、结果更可靠； ■ 针对目标基因或序列，可以进行灵活的探针设计，新探针设计一周内可完成 QuantiGene ViewRNA的应用： QuantiGene® ViewRNA在疾病研究、干细胞、再生医学、基因沉默效果检测、神经生物学、分子标志物的验证等领域都有着广泛的运用。 2、QuantiGene® 2.0 QuantiGene 2.0 Assay可检测各种类型样本的miRNA, RNA, 或DNA 优点： ■ 结果更精确(MAQC study, Nature Biotechnology, September 2006) ■ 可检测细微的表达差异----能够区分出10%的基因表达差异，而qPCR只能区分出倍数的变化 ■ 可以区分出单个细胞中DNA分子一个拷贝数的差异 ■ 可区分出miRNA两个碱基的差异 ■ 对样本进行直接定量分析 ■ 能够很好地检测FFPE样本，不受H&E染色和福尔马林固定的影响，并可以检测降解的RNA ■ 能够很好地检测血液样本，不需要降解球蛋白，样本检测用量少，甚至仅用10ul全血就可检测 ■ 避免了在RNA/DNA抽提，反转录和PCR扩增过程中，人为操作的误差和假阴性和假阳性的结果 QuantiGene 2.0的应用： QuantiGene 2.0技术被广泛地用于信号通路的基因表达定量分析，回顾性临床研究和诊断治疗决策中的FFPE和血液样本的生物标志物的验证，芯片结果的验证，毒理学预测，RNAi干扰效果的检测，DNA拷贝数变异分析。 3、QuantiGene® Plex QuantiGene Plex是应用Luminex平台，可以在同一反应孔中同时检测最多36个目标基因，并进行准确定量的创新性产品，在一些较难准确定量的样本（临床收集的FFPE样本和血液样本）中，有着不俗的表现。我们还提供6个物种，250个已验证的多重蛋白和细胞因子的定量试剂，更多的信息，请跟基因公司的当地销售联系。 优点： ■ 在同一反应孔中最多可以做到36RNA/34DNA的检测 ■ 无需样本抽提；可以检测纯化的RNA或DNA，即使是RNA降解，质量较差的样本 ■ 无需反转录和PCR扩增，避免了这两个过程中造成的假阴性、假阳性和人为误差 ■ 结果更加精准，极大限度地避免了操作者、工作环境、板间差异所造成的误差 ■ 免受福尔马林，H&E染色，黑色素、球蛋白或其他一些高表达的蛋白对酶的抑制，所造成的干扰 QuantiGene Plex的应用： QuantiGene Plex RNA 和 QuantiGene Plex DNA Assays在筛选和准确定量基因标记都有着广泛运用，如信号转导通路的研究，回顾性临床研究和诊断治疗决策中的FFPE和血液样本的生物标志物的验证，芯片结果的验证，毒理学预测，RNAi干扰效果的检测，DNA拷贝数变异分析。