超声帖子要点总结
丁香园论坛
1581
1,超声效果判定:
a)一般要在超的过程中监测，超几下就做个玻片染色，在你的视野里应该还能看到几个没有破碎的菌才行，没有这样完好的菌存在就说明你超过了，蛋白就会完蛋了。监测几次就有经验了，也不用每次都染就行了。最简单的方法：涂片--革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟---显微镜观察
切记：只用结晶紫染色,别忘了染色后再用水稍冲洗一下
b)我们的作法是：在第一次使用超声破碎仪时监测OD600以确定功率和时间，取5微升样品加入1毫升水，OD600降到起始值的10%以下时说明破菌完成。
c)一般超声后菌液感觉变得更透明了
d)超声好的样品轻旋时明显感觉到不是很粘的，离心后沉淀体积也明显小于当初的细胞沉淀体积。
2注意事项:
a)另外，在超声过程中要避免产生气泡，超声头要伸入液面以下一段距离。
b)产热蛋白变性是会起泡沫或颜色变黑,超声是一个产热过程，应该把离心管置于冰浴中超声，
另外，一定要冰水浴，而且水要多于冰，因为水的传热强于冰。因为离心管的散热性不好，使冰水浴的效果下降，建议使用小烧杯。
c)功率选择根据超声的体积，体积大者功率大，宜选用不起泡沫情况下的最大值为宜，我的经验中10毫升管200W没问题；超声仪上应该有一个调功率的旋钮，超声的功率也不能太大，否则也容易碳化，一般不需要用最大的频率。tune应该是调功率的,我记得以前旋纽的位置是低于1/2的.
另外要保证间歇时间大于超声时间，根据相应的文献确定这两个具体的时间。
3,例子
a)我以前做蛋白大量表达超声破碎时，总体积为200ml，功率300瓦，超3秒，停3秒，60次为一个循环，每个循环之间停5min，共作了3个循环，效果很好。
b)超声可以小量,按1:4 PBS重悬菌体,在1.5 ml 离心管里用0.5 ml悬液, 70W 15秒,停30秒,再15秒, 差不多了, 也可以用10 ml管, 不过会产热不均匀, 最好用大的超声探头.
c)我的经验是超10秒停10秒，总共超声5分钟足矣。
经验值是楼主的10毫升（1克菌）体系200W超声3到5分钟（不包括间歇时间）足矣。
d)我使用的条件是工作5s,停15s，一共20m.但是不同的超声波破碎仪功率是不一样的，仅仅用超声频率来描述工作条件是不够的。你提到的“需要15分钟”，我认为是指工作和停止的时间加起来15分钟，不是指超声累计15分钟。
e)这是一个实验室的超声条件：
300W, 超2秒，间隔2秒，重复99次
你可以试试超1秒停1秒或超0.5秒停1秒，总超声时间（不是总时间）在十分钟左右，另外，你用10ML离心管的话功率差不多200W就可以了，
以上均从网友的帖子中摘录
a)一般要在超的过程中监测，超几下就做个玻片染色，在你的视野里应该还能看到几个没有破碎的菌才行，没有这样完好的菌存在就说明你超过了，蛋白就会完蛋了。监测几次就有经验了，也不用每次都染就行了。最简单的方法：涂片--革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟---显微镜观察
切记：只用结晶紫染色,别忘了染色后再用水稍冲洗一下
b)我们的作法是：在第一次使用超声破碎仪时监测OD600以确定功率和时间，取5微升样品加入1毫升水，OD600降到起始值的10%以下时说明破菌完成。
c)一般超声后菌液感觉变得更透明了
d)超声好的样品轻旋时明显感觉到不是很粘的，离心后沉淀体积也明显小于当初的细胞沉淀体积。
2注意事项:
a)另外，在超声过程中要避免产生气泡，超声头要伸入液面以下一段距离。
b)产热蛋白变性是会起泡沫或颜色变黑,超声是一个产热过程，应该把离心管置于冰浴中超声，
另外，一定要冰水浴，而且水要多于冰，因为水的传热强于冰。因为离心管的散热性不好，使冰水浴的效果下降，建议使用小烧杯。
c)功率选择根据超声的体积，体积大者功率大，宜选用不起泡沫情况下的最大值为宜，我的经验中10毫升管200W没问题；超声仪上应该有一个调功率的旋钮，超声的功率也不能太大，否则也容易碳化，一般不需要用最大的频率。tune应该是调功率的,我记得以前旋纽的位置是低于1/2的.
另外要保证间歇时间大于超声时间，根据相应的文献确定这两个具体的时间。
3,例子
a)我以前做蛋白大量表达超声破碎时，总体积为200ml，功率300瓦，超3秒，停3秒，60次为一个循环，每个循环之间停5min，共作了3个循环，效果很好。
b)超声可以小量,按1:4 PBS重悬菌体,在1.5 ml 离心管里用0.5 ml悬液, 70W 15秒,停30秒,再15秒, 差不多了, 也可以用10 ml管, 不过会产热不均匀, 最好用大的超声探头.
c)我的经验是超10秒停10秒，总共超声5分钟足矣。
经验值是楼主的10毫升（1克菌）体系200W超声3到5分钟（不包括间歇时间）足矣。
d)我使用的条件是工作5s,停15s，一共20m.但是不同的超声波破碎仪功率是不一样的，仅仅用超声频率来描述工作条件是不够的。你提到的“需要15分钟”，我认为是指工作和停止的时间加起来15分钟，不是指超声累计15分钟。
e)这是一个实验室的超声条件：
300W, 超2秒，间隔2秒，重复99次
你可以试试超1秒停1秒或超0.5秒停1秒，总超声时间（不是总时间）在十分钟左右，另外，你用10ML离心管的话功率差不多200W就可以了，
以上均从网友的帖子中摘录
