【交流】比苯酚抽提法更简单的血清中病毒DNA的提取方法小结

今天老师让我找一些比苯酚氯仿抽提法更简单的方法。通过专利文献和杂志，发现了一些简单的方法。

现小结一下---血清中病毒DNA的提取

一 煮沸法

从血清中提取病毒DNA，与其它方法比较，此法最为简单，并且很多文献都有报道 。

鲁艳芹等在一篇名为《乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒》专利(专利申请号为200610044679)中对六种方法提取血清中乙型肝炎病毒DNA的效率做了比较，得出结果是：NaOH裂解法最佳，其次是直接煮沸法，但该法不适合提取粘稠度较高的血样标本。说明直接煮沸法还是可以的。

另外，陈秀珍等人《采用不同方法提取血清及乳汁中HBV-DNA扩增结果分析》对抽提法、热处理、碱变性法提取乙肝标志物阳性出产妇血清及乳汁中HBV-DNA方法进行评价，发现血清标本HBV-DNA的提取，三种方法无明显差异。

陈秀珍等：取血清100ul，放入0.5ulEP管中，沸水中煮10分钟，10000r/m,离心5分钟，取上清备用。

专利：取血清100ul和100ulPBS，煮沸10分钟，12000rpm, 离心5分钟，取上清备用.

两篇文章所用的煮沸法大致一样,只是是否加PBS的差异。加PBS，这样使得血清在煮10分钟后，不会干掉，没有上清，另外，它不会干扰核酸的提取。加TE是否也可以呢？

二 裂解液煮沸法

郭龙华等《3种方法从血清标本中提取I--IBV DNA 的比较》

比较3种从血清标本中提取HBV DNA方法的效果，选出一种快速、简单、高效提取血清中HBV DNA的方法——裂解液煮沸法，此法提取的HBV DNA模板含量最高，与碱裂解法和蛋白酶K-苯酚抽提法之间的差异显著 (P<O．05)。

裂解液配制 (10 mmol/L Tris—HC1，1 mmol/L EDTA，15 mmol/L 氯化钠，0．5％SDS，pH 8．0).

取5Oul 血清加1Oul 裂解液，混匀,煮沸1O分钟，5 O00xg离心5分钟，取上清液备用，平均每管大约可以取到2Oul上清液。

裂解液煮沸法是一种快速、简便、高效的提取HBV DNA的方法。特别适用于大批量标本，该法同时可节约实验成本和时间，具有很大的应用价值。

三 碱裂解法

在不同的文献中，虽然都称为碱裂解法，但是所用的量不同，导致的结果就不同。

郭龙华等《3种方法从血清标本中提取I--IBV DNA 的比较》，所用的碱裂解法 ：5Oul血清加45ulddH20加5ulmol/L氢氧

化钠，混匀，37℃ 2O分钟，加入5 u1mol/L 氯化氢，10 O00xg

离心5分钟，取上清液备用.NaOH的终浓度只有0.01M，所以去蛋白效果不好，明显影响了PCR效果。

而陈秀珍等人《采用不同方法提取血清及乳汁中HBV-DNA扩增结果分析》，所用的碱变性法：50ul样品加入0.5mlEppendorf管中，再加50ul02mol／L NaOH，置37℃水浴1小时，再加50ul 0.2mol／L HC1置93℃10分钟，10000rpm／min离心5分钟，上清液备用. 与抽提法和热处理法无显著性差异。此法NaOH的终浓度为0.1M。

另外，鲁艳芹等在《乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒》专利(专利申请号为200610044679)中使用的碱裂解法：100ul血清加入100ul0.3mol/L 的NaOH ,80℃ 温育10分钟，12000rmp室温离心5分钟，吸取上清加入50ul 0.4mol/L 的Tris-HCl PH7.5, 4℃保存。结果显示为阴性。