【求助】请教非单一且高度同源基因的RNAi问题,研究过小鼠骨钙素的请进
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小鼠有三个串联的骨钙素(BGP,或OC)基因OG1、OG2、ORG,其中OG1和OG2在骨中表达,其基因序列高度同源但不完全一致,产物mRNA及蛋白亦稍有序列差别。
但是看文献中的骨钙素mRNA 的RT-PCR检测,均不提引物根据哪个基因设计;蛋白水平的检测亦不区分BGP1和BGP2,市面的小鼠骨钙素放免或酶免试剂盒亦笼统一用。
请教:我要做小鼠源成骨细胞的BGP RNAi,该以哪个基因为靶基因?随便选其中一个还是两个都照顾到?做RT-PCR时引物又当根据哪个基因设计?
有经验的战友请指教,多谢!
但是看文献中的骨钙素mRNA 的RT-PCR检测,均不提引物根据哪个基因设计;蛋白水平的检测亦不区分BGP1和BGP2,市面的小鼠骨钙素放免或酶免试剂盒亦笼统一用。
请教:我要做小鼠源成骨细胞的BGP RNAi,该以哪个基因为靶基因?随便选其中一个还是两个都照顾到?做RT-PCR时引物又当根据哪个基因设计?
有经验的战友请指教,多谢!
有没有人知道啊,等待指教
1、建议你把看到的文章中的引物,拿去和已知序列做blast。这样可大致判断其到底根据哪个基因设计的。
2、 建议你直接写信给作者,一般作者都愿意答复你的。
3、这篇文章有基因号:
Journal of Cellular Biochemistry
Volume 99 Issue 3, Pages 986 - 994
Forward and reverse primer sequences for OCN (GeneBank NM007541) are 5-GTG AGC TTA ACC CTG CTT GTG A-3 and 5-ACT GAA CTT GAC CGT ACA TGC GTT TGT AGG CGG TCT TC-3, respectively
2、 建议你直接写信给作者,一般作者都愿意答复你的。
3、这篇文章有基因号:
Journal of Cellular Biochemistry
Volume 99 Issue 3, Pages 986 - 994
Forward and reverse primer sequences for OCN (GeneBank NM007541) are 5-GTG AGC TTA ACC CTG CTT GTG A-3 and 5-ACT GAA CTT GAC CGT ACA TGC GTT TGT AGG CGG TCT TC-3, respectively
简繁 wrote:
小鼠有三个串联的骨钙素(BGP,或OC)基因OG1、OG2、ORG,其中OG1和OG2在骨中表达,其基因序列高度同源但不完全一致,产物mRNA及蛋白亦稍有序列差别。
但是看文献中的骨钙素mRNA 的RT-PCR检测,均不提引物根据哪个基因设计;蛋白水平的检测亦不区分BGP1和BGP2,市面的小鼠骨钙素放免或酶免试剂盒亦笼统一用。
请教:我要做小鼠源成骨细胞的BGP RNAi,该以哪个基因为靶基因?随便选其中一个还是两个都照顾到?做RT-PCR时引物又当根据哪个基因设计?
有经验的战友请指教,多谢!
siRNA是有高度特异性的,一般一个siRNA都是针对一个特殊基因的,至于能否找到一个siRNA能够沉默几个同源基因就要看具体的情况了,即使靶点是一样的可能沉默的效率都是不同的。像你这样的情况主要要考虑要到达你研究的目的是需要把三个基因都沉默掉还是看只是其中的某个,即这三个基因能不能相互补偿你所要研究的功能。
非常感激楼上各位指教!
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