淋病奈瑟菌的检验

互联网2015-08-29

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<center> </center> 淋病奈瑟菌简称淋球菌，是常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜，人类是其唯一的天然宿主和传染源。人类对淋球菌无自然<a target="_blank">免疫</a>力，均易感，病后<a target="_blank">免疫</a>力不强，不能防止再感染。

1 生物学特性

1.1 形态与染色淋球菌呈肾形或咖啡豆形，菌体直径0.6～0.8 μm。常成对排列，邻近面扁平或稍凹陷，形似咖啡豆。在急性感染的机体内，其形态较典型，通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外。从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛，经人工培养后，呈卵圆形或球形，排列不规则。无鞭毛和芽孢。淋球菌革兰染色阴性。用碱性美蓝染色时，菌体呈蓝色。用Pappehheim Saathof染色时，菌体呈红色，背景为天蓝色。

1.2 结构淋球菌外面结构为外膜，外膜的主要成分为膜蛋白、脂多糖和菌毛。膜蛋白可使淋球菌黏附于人体黏膜上，通过细胞吞噬作用进人细胞，在细胞内大量繁殖，导致细胞崩解，淋球菌扩散到黏膜下层引起感染。菌毛易黏附于子宫腔和口腔上皮细胞表面，有致病力及传染性。

1.3 培养特性淋球菌培养要求高，一般不易培养，需在培养基中加入血液、血清或多种氨基酸和无机盐类物质。淋球菌最适PH为7.5，最适温度为35-37℃。常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。初次分离培养在血琼脂或巧克力琼脂上5%-10%CO2条件下生长良好，经24-48h培养后，可见表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直径0.5-1.0mm的圆形菌落[1]。

1.4 <a target="_blank">生化</a>反应淋球菌可发酵葡萄糖、产酸，但不发酵麦芽糖、蔗糖和乳糖。氧化酶和触酶试验均阳性。

1.5 抵抗力淋球菌有自溶现象，因其能产生自溶酶，易发生自溶造成死亡[2]。淋球菌对外界理化因素的抵抗力较弱，对热作用很敏感；不耐干燥，在完全干燥的环境中1～2 h即死亡，但若附着于衣裤和被褥中，则能生存18～24 h。淋球菌对消毒剂的抵抗力极差，1%苯酚溶液能在3 min内将其杀灭，1：4000硝酸银溶液7 min可将其杀死，除耐药菌株外，淋球菌对抗生素敏感，但抗生素的最小抑菌浓度逐渐有所提高。

2 致病机制

淋球菌对柱状上皮细胞和移行上皮细胞有特别的亲和力。男女性尿道和女性宫颈覆盖有柱状上皮和移行上皮，故易受淋球菌侵袭。淋球菌菌毛上的特异性受体可与黏膜细胞相应部位结合；其外膜蛋白Ⅱ可介导黏附过程；它还可产生IgAl蛋白酶，降解具有抑制其粘附于黏膜表面作用的IgA。这样，淋球菌与上皮细胞迅速黏和，然后被吞噬到细胞内。一旦进入细胞，便开始繁殖，直至充满整个细胞。淋球菌释放内毒素，介导免疫反应从而引起上皮细胞受损。细胞溶解后释放淋球菌至黏膜下间隙，引起黏膜下组织感染。淋球菌通过其内毒素脂多糖、补体和IgM等协同作用，形成炎症反应，使黏膜红肿。淋球菌感染后造成的炎症可沿泌尿、生殖道蔓延播散，在男性可扩展至前列腺、精囊腺、输精管和附睾，在女性可蔓延到子宫、输卵管和盆腔。严重时淋球菌可进入血液循环系统，播散到身体其他部位。

3 <a target="_blank">微生物</a>学和医学<a target="_blank">分子生物学</a>检验

3.1 标本采集男性患者采用尿道口脓性分泌物及一次性拭子插入尿道内2-4cm处取分泌物；女性患者则以一次性拭子插入宫颈口0.5-1cm处取分泌物黏液。将上述取得的分泌物，首先轻轻涂布于载玻片上；然后取分泌物于无菌试管中，注意保湿保暖[3]并及时送检。

3.2 <a target="_blank">实验室</a>鉴定方法

3.2.1 直接涂片染色法涂片直接革兰染色后在显微镜下观察，可见淋球菌呈革兰染色阴性，菌体呈卵圆形或肾形，常成对排列，两菌以平坦面相靠，形似一对咖啡豆。有时可见淋球菌位于中性粒细胞内。一旦发现形态典型的革兰阴性双球菌，报告为“找到革兰阴性双球菌咖啡豆形，成双排列，分布于多形核细胞内外，形似淋球菌[4]”。该方法检出率较低，但特异性高且经济实用、简便易行。

3.2.2 <a target="_blank">细菌</a>分离培养法取分泌物直接连续划线接种于血琼脂或巧克力琼脂平板上，置于含5%-10%CO2，35℃培养箱内培养24h后，观察发现直径0.5-1mm，呈圆形、光滑、湿润、凸起、半透明或灰白色菌落。淋球菌具有氧化酶和触酶，分解葡萄糖产酸，不分解蔗糖、麦芽糖和乳糖。<a target="_blank">细菌</a>培养是检验诊断淋球菌感染的“金标准”，目前仍为诊断淋病最可靠的方法。但淋球菌对外环境抵抗力极弱，对冷、热、干燥和化学消毒剂大都敏感；且临床标本的采集、输送、培养接种方式等都可能影响<a target="_blank">检验结果</a>的准确性。

3.2.3 快速检测法采用淋病检测试纸进行检测，与比色卡阳性颜色相比，试纸变色一致则确认为阳性。

3.2.4 荧光定量PCR法具体操作步骤严格按照PCR试剂盒说明书进行操作。最后结果判断时在紫外线投射分析仪上观察，与阳性对照区带相同，清晰、规则、明亮、较窄的区带判为阳性，否则为阴性。该方法是一种较为先进的分子生物学检验技术，借助于一种DNA扩增技术，能将含微量淋球菌的标本处理经2-3 h后扩增放大几百万倍，属于一种基因诊断技术[5]。它具有特异性强、灵敏度高、简便、快速、对标本的纯度要求低等优点。