实验1 坐骨神经-腓肠肌标本的制备

实验1 坐骨神经-腓肠肌标本的制备

　　【目的要求】

　　1．学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

　　2．学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

　　【动物与器材】

　　蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊毁髓针、玻璃解剖针）、蜡盘、蛙板、玻璃板、固定针、锌铜弓、培养皿、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。

　　【方法与步骤】

　　1．双毁髓的方法左手握蟾蜍（一般可用纱布包住蟾蜍躯干部），背部向上（图2-1）。用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由凹陷处垂直刺入，即可进入枕骨大孔。然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以捣毁脑组织。如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针触及颅骨。此时的动物为单毁髓动物。再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。彻底捣毁脊髓时，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后瘫软。此时的动物为双毁髓动物。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。操作过程中应注意使蟾蜍头部向外侧（不要挤压耳后腺），防止耳后腺分泌物射入实验者眼内（如被射入，则立即用生理盐水冲洗眼睛）。

　　2．剥制后肢标本方法有两种。

　　(1)将双毁髓的蟾蜍背面向上放入蜡盘中。左手持手术镊轻轻提起两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪开皮肤，暴露耳后腺后缘水平的脊柱。用金冠剪横向剪断脊柱。左手持手术镊提起断开的脊柱后端，右手用金冠剪沿脊柱两侧剪开体壁，再剪断下腹壁肌肉，自基部剪断内脏。然后用蘸有任氏液的左手捏住断开的脊柱后端，右手向后方撕剥皮肤，同时弃其头部及内脏。将剥干净的后肢放入盛有任氏液的培养皿中。清洗手及手术器械上的污物。

　　(2)将双毁髓的蟾蜍腹面向上放入蜡盘中，左手持手术镊轻轻提起腹壁皮肤，右手持手术剪将皮肤剪开，再剪开腹壁肌肉。然后用手术镊轻轻提起内脏，自基部剪断（勿伤脊神经）。左手轻轻托起蟾蜍后肢，使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发出部位，于其前方剪断脊柱。剥皮的操作方法同(1)。

　　注意操作过程中不可将剥皮的标本同皮肤、内脏等弃物放在一起。

　　3．分离两后肢将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧。用左手拇指及食指压住标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。然后用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱（尾杆骨留在一侧），使两后肢完全分离。也可不用手术刀切开耻骨联合，而用左手托起标本，右手持金冠剪直接剪开耻骨联合。注意：操作要十分小心，切勿剪断坐骨神经。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。

　

　　4．分离坐骨神经将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底朝上（图2—2），用固定针将标本固定在玻璃板下面的蛙板（木板或硬泡沫塑料板）上。用玻璃解剖针沿脊神经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，找出坐骨神经。坐骨神经基部（即与脊神经相接的部位），有一梨状肌盖住神经，用玻璃解剖针轻轻挑起此肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。剪断梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。再用玻璃解剖针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的分支，将坐骨神经分离至腘窝处。用金冠剪剪去脊柱骨及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。取下脊柱端的固定针，用手术镊轻轻提起脊柱骨的骨片，将神经搭在腓肠肌上。

　　5．分离股骨头左手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，用金冠剪自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉。保留股骨的后2/3，剪断股骨。

　　6．游离腓肠肌用手术镊（尖头镊）在腓肠肌跟腱下穿线，并结扎。提起结扎线，剪断肌腱与胫腓骨的联系，游离腓肠肌。剪去膝关节下部的后肢，保留腓肠肌与股骨的联系，制备完整的坐骨神经-腓肠肌标本。标本应包括：坐骨神经、腓肠肌、股骨头和一段脊柱骨四部分（图2-3）。

　　7．检验标本左手持手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻璃板，右手持经任氏液蘸湿的锌铜弓，使其两极接触神经，如腓肠肌发生收缩，则表示标本机能正常。右手提起腓肠肌上的结扎线，轻轻将标本放入任氏液中（切勿使神经受牵拉），稳定15—20min，即可进行实验。

　　注意，制备标本过程中经常用任氏液湿润去皮的标本。