微量简易诊检系统

实验四十三 微量简易诊检系统

　　一、目的要求

　　了解微量简易诊检系统的原理及其优越性，学习使用E-15系统的方法。

　　二、基本原理

　　各种不同的脱水试验培养基和指示剂被吸附在滤纸片上或直接加入特殊的分隔室内，构成一微量生化诊检卡，加入某一试验菌液，培养后即能得到反应结果，可用来对试验菌进行诊断与鉴定。

　　国际上广泛使用的有API-20E系统（Analytab ProductsInc．），它有20个塑料分隔室，即含有20种不同的脱水培养基，每一分隔室可进行一种生化反应，个别室可进行两种生化反应，主要用来鉴定肠杆菌科细菌，如图Ⅹ-5所示。

　　国内研制的E-15系统，它有15个分隔室，各含一种供不同生化反应的脱水试验培养基，也是一种微量生化鉴定肠道菌的简易试验系统。目前还有许多诊检其他微生物的微量简易诊检系统，它们与常规的生化反应鉴定方法比较，具有快速、准确、重复性好、操作简易和在人力、物力、时间、空间以及经济上节约等优点，它是微生物学快速和自动化诊断、检查和鉴定发展方向的一个重要方面，在微生物学实验室内也将取得更广泛的应用。

　　E-15系统由生化诊检卡、标准色板、编码检索表等组成，它可鉴定肠杆菌科中14个属41个种。

　　三、器材

　　大肠杆菌；

　　E-15系统生化诊检卡，标准色板，编码检索表，伏-普试验试剂，硝酸盐反应试剂；

　　pH为6．4-6．8的0．5% NaCl灭菌盐水，液体石蜡，灭菌毛细滴管等。

　　四、操作步骤

　　1．用接种环将大肠杆菌菌苔刮下并转入5ml0．5%NaCl溶液中，制成每毫升含5—10亿个细菌的菌液，混合均匀。

　　2．将密封包装打开，取出E-15生化诊检卡，标明试验菌株、日期和试验者。

　　3．用无菌毛细滴管吸大肠杆菌菌液，沿分隔室内壁缓缓加入各分隔室，避免形成气泡，如果形成了气泡则轻轻摇动使其除去。如果要做氧化发酵试验，则需要在一葡萄糖底物的分隔室中加入液体石蜡，使其封盖菌液面。

　　4．将接种的E-15生化诊检卡放入装有水的培养盒中或浅碟上，置37℃培养。

　　5．培养24小时后，在V．P．和硝酸盐分隔室内分别加入一滴V．P．反应试剂和硝酸盐反应试剂，V．P．试验需在加入反应试剂后20—30分钟时再观察结果。根据E-15实验项目的变色范围（如表X-1所示），对照E-15鉴定标色板，观察各项生化反应的变色情况，确定它们是阳性反应或阴性反应，即各项生化反应结果。

　　6．编码的检索方法

　　根据各项生化反应结果，按记录编码表的顺序，把三个生化试验编为一组，其顺序代号分别是4、2、 1三个数字，凡结果阳性者记“ ”，阴性者记“-”。15种生化反应编为五组，将每组生化反应阳性者的代号数相加即得编码数，全阳性编码为7，全阴性编码为0，这样就形成了5位数字的编码。

　　具体编码如下：

　　举例说明：

　　查阅微量快速生化鉴定编码检索表25413栏，便可得到沙门氏菌概率为99．9％。

　　7．氧化发酵试验结果判定见表Ⅹ-2。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　将结果填入E-15编码记录表中。

　　根据所得的编码，查E-15编码检索表，得到试验菌株的分类答案。也可将实验所得的编码输入微机苹果Ⅱ或PC-1500，进行计算机检索，打印出判定结果，即试验菌株的鉴定答案。

　　2．思考题

　　根据实验结果，你认为微量简易诊检系统有什么优点？有什么不足之处？