如何做好肥达、外斐试验

<font> <p> <span>作者：赵晴 昆明市东川区人民医院<a target="_blank"><u>检验科</u></a></span></p> <p> <strong>肥达反应(Widal test):</strong></p> <p> 用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H抗原，检测受检血清中有无相应抗体的半定量凝集试验，称肥达反应(Widal test)。本试验与<a target="_blank"><u>细菌</u></a>分离培养同时进行或在前者失败的情况下，能辅助诊断伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起的肠热症。</p> <p> <strong>外斐反应(Wiel-Felix):</strong></p> <p> 斑疹伤寒等立克次体与变形杆菌某些X株的菌体抗原(OX_k、OX₁₉、OX₂抗原)具有共同的耐热性多糖类属抗原，常用后者代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，这种交叉凝集试验称为外斐反应，用于立克次体病的辅助诊断。</p> <p> <span>传统的肥达、外斐试验采用试管法，存在试剂用量大、结果不易观察等缺点，现介绍一种较实用的平板法，试剂用量仅为试管法<em>1/2</em>、结果易判定等优点。</span></p> <p> <br /> <strong><span>试验的第一步（准备）：</span></strong></p> <p> 准备一块U型反应板，长18厘米，宽9 厘米，每孔容积1 毫升，并在上面做出清晰标识。</p> <p> <img src="http://res.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2016/12/21/A1482285862143gksbsib7uw.jpeg" /></p> <p> <strong>试验第二步（加样）：</strong></p> <p> 为方便说明加样步骤,先看反应板示意图：</p> <p> 第五排 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○</p> <p> 第四排 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○</p> <p> 第三排 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○</p> <p> 第二排 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○</p> <p> 第一排 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○</p> <p> （从底部算起）</p> <p> O H 甲 乙 丙 OX_k OX₁₉OX₂</p> <p> <strong>操作步骤</strong></p> <table> <tbody> <tr> <td> <p> </p> </td> <td> <p> 第一排</p> <p> （空白对照）</p> </td> <td> <p> 第二排</p> </td> <td> <p> 第三排</p> </td> <td> <p> 第四排</p> </td> <td> <p> 第五排</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 生理盐水</p> </td> <td> <p> 250ul</p> </td> <td> <p> -----------</p> </td> <td> <p> ----------</p> </td> <td> <p> ----------</p> </td> <td> <p> ----------</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 稀释血清</p> </td> <td> <p> </p> <p> ----------</p> </td> <td> <p> （取一塑料试管：3.8ml生理盐水+0.2ml血清）</p> <p> 每孔加250 ul，共计8孔，用去2ml.</p> </td> <td> <p> 补充2 ml生理盐水，每孔加250ul。</p> </td> <td> <p> 补充2 ml生理盐水，每孔加250ul。</p> </td> <td> <p> 补充2 ml生理盐水，每孔加250ul。</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 血清稀释倍数</p> </td> <td> <p> ----------</p> </td> <td> <p> 1：20</p> </td> <td> <p> 1：40</p> </td> <td> <p> 1：80</p> </td> <td> <p> 1：160</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> （O、H、甲、乙、丙、OX_k 、OX₁₉、OX₂）相应菌液</p> </td> <td> <p> 250ul</p> </td> <td> <p> 250ul</p> </td> <td> <p> 250ul</p> </td> <td> <p> 250ul</p> </td> <td> <p> 250ul</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 最终稀释倍数</p> </td> <td> <p> ----------</p> </td> <td> <p> 1：40</p> </td> <td> <p> 1：80</p> </td> <td> <p> 1：160</p> </td> <td> <p> 1：320</p> </td> </tr> </tbody> </table> <p> <span><strong>试验第三步：混匀</strong></span></p> <p> 用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度（100转/分）混合3分钟。</p> <p> <img src="http://res.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2016/12/21/A1482285861569gfvm9gpytw.jpeg" /></p> <p> <span><strong>试验第四步：恒温</strong></span></p> <p> 放37℃度水浴箱恒温24小时，放水浴箱时请用纸板或其它物品做必要遮挡，此步不可省略，否则，请看下图：</p> <p> <img src="http://res.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2016/12/21/A1482285862759cyxqha357p.jpeg" /></p> <p> 这是遮盖纸板收集到的水滴。若这些水滴至反应板内，看结果时就真是葫芦僧乱判葫芦案了。做任何试验，细节真的很重要。</p> <p> <span><strong>结果判定：</strong></span></p> <table> <tbody> <tr> <td> <p> 结果判定</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 反应图像</p> </td> <td> <p> 判定</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 菌液呈点状聚集，外周边缘平滑。</p> </td> <td> <p> （ - ）</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 产生凝集现象，凝集颗粒或絮状在底部呈膜状延展。</p> </td> <td> <p> （ + ）</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 以能清晰见到凝集反应（ + ）的最高稀释度为凝集效价。</p> </td> </tr> </tbody> </table> <p> </p> <p> <strong>肥达反应临床意义：</strong></p> <p> 1、 一般O>1:80,H>1:160,甲、乙、丙>1:80才有临床意义，或在疾病早期及中后期分别采集两次血清，若第二份血清比第一份的效价高4倍以上增高具有诊断价值。</p> <p> 2、 O及甲、乙其中之一项或丙凝集效价增高时，可以诊断副伤寒甲、乙、丙的某一种。</p> <p> 3、 O抗原产生的抗体为lgM, 出现较早，存在于血清的时间较短，与相应的抗血清反应时呈颗粒状凝集;H抗体为lgG, 出现较迟，持续存在的时间较长，与相应的抗血清呈絮状反应。</p> <p> 4、 O高H不高：</p> <p> a .疾病早期；</p> <p> b.沙门菌属中其它菌种感染引起的交叉反应；</p> <p> c.H→O变异的沙门菌引起的感染。</p> <p> 建议一周后复查，如一周后H也有升高，可证实为肠热症。</p> <p> 5、 H高O不高：</p> <p> a .可能为疾病的晚期；</p> <p> b.以往患过伤寒、副伤寒或接受过预防接种；</p> <p> c.回忆反应等。</p> <p> </p> <p> <strong>外斐反应临床意义：</strong></p> <p> 1、 血清抗体效价达1：160以上有意义。病程中双份或多份血清试验，若效价有4倍以上增高具有诊断意义。</p> <table> <tbody> <tr> <td> <p> 立克次体病</p> </td> <td> <p> 变形杆菌抗原</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> OX₁₉</p> </td> <td> <p> OX₂</p> </td> <td> <p> OX_k</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 流行性斑疹伤寒</p> </td> <td> <p> 4+</p> </td> <td> <p> +</p> </td> <td> <p> 一</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 地方性斑疹伤寒</p> </td> <td> <p> 4+</p> </td> <td> <p> +</p> </td> <td> <p> 一</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 斑点热</p> </td> <td> <p> 4+或+</p> </td> <td> <p> +或4+</p> </td> <td> <p> 一</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 恙虫病</p> </td> <td> <p> 一</p> </td> <td> <p> 一</p> </td> <td> <p> 4+</p> </td> </tr> <tr> <td> <p> 腺热</p> </td> <td> <p> 一</p> </td> <td> <p> 一</p> </td> <td> <p> 2+</p> </td> </tr> </tbody> </table> <p> 2、 往往有些病例在整个疾病过程中效价不见上升，如复发型斑疹伤寒及约15%的经疫苗接种后感染斑疹伤寒的病例。</p> <p> 3、 有些轻症斑疹伤寒或某些发病严重者，其它血清学试验阳性，但其外斐反应可阴性。</p> <p> 4、 恙虫病立克次体和变形杆OX_k株有共同的抗原成分，恙虫病患者血清与OX_k抗原发生凝集而不与OX₁₉、OX₂发生凝集。</p> <p> 5、 假阳性反应还发生在变形杆菌尿路感染、伤寒、钩端螺旋体病，回归热、疟疾及各种病因引起的严重肝病的病人血清检查，孕妇也往往呈假阳性反应。因此，对外斐反应结果应结合临床慎重分析和判断。</p> <p> </p> <h3> <span><strong>实例分析：</strong></span></h3> <p> <img src="http://res.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2016/12/21/A14822858619108wwhekjzm5.jpeg" /></p> <p> 此板肥达、外斐试验结果为阴性。如果足够细心的话，可以看到OX_k第二排（血清最终稀释倍数1：40）出现了异常，是因为变形杆菌抗原很不稳定，特别是经保存以后往往会使血清效价增高，尤以OX_k抗原为甚。因而一般不宜作长久保存，并应与阳性病人血清校正其凝集性。</p> <p> <img src="http://res.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2016/12/21/A1482285861373wiaftqbxmd.jpeg" /></p> <p> 此板O抗原第二排（血清最终稀释倍数1：40）出现了凝集，</p> <p> <img src="http://res.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2016/12/21/A1482285861696qqr5cpxmvh.jpeg" /></p> <p> 此板O抗原与相应的抗血清（血清最终稀释倍数1：320）呈现了颗粒状凝集;H抗原与相应的抗血清（血清最终稀释倍数1：320）呈现了絮状凝集。</p> <p> <span>本文由作者授权全网首发，转载请注明作者及来源。</span></p> (责任编辑：admin) </font>