5 步搞定 Western Blot 结果图的灰度扫描

今天组会后师妹很不开心，因为老板看了她的 western blot 的结果图后一脸严肃的说：你这个差异不明显啊。

师妹说怎么就差异不明显了，我觉得挺明显的啊，她凑近电脑屏幕看了看后，又后仰身体拉大了距离进行观察，就差拿尺子来测量条带的长宽了。

我被我这可爱的师妹给萌化了，但又不忍心看她愁眉苦脸的样子，于是轻抚摸师妹的秀发，深情的说到：妹妹，给你安利一款软件，轻松搞定 WB 结果表达差异。

好了，下面就奉上使用 Gel-Pro Analyzer 对 WB 结果进行灰度扫描的详细教程啦。

1. 首先按我上次给你们写的教程（献给初学者：手把手教你用 PS 做出漂亮的 WB 结果图），使用 PS 将 WB 结果图处理好，然后打开 Gel-ProAnalyzer（这是一个绿色版的小软件，直接打开无需安装），点左上角的 File，然后打开自己要做灰度扫描的图片。

2. 上图中最右边那个是一个工具栏，第一个按钮是 Rotate，就是旋转的意思，当你的图的条带不是很正的时候就可以用到，但是如果你是用我上一个教程做出来的图，就不需要使用这个按钮了。

不过这个也是有使用的时候的，就是你在跑完 WB 后想迫切知道不太明显的结果是否有差异的时候就可以用到，如下图：点击 Rotate 之后会出现一些黑色的格子，然后在 Rotate 的那个小窗口里面填写数字，正数是顺时针旋转，负数为逆时针，填好数字后点 ok 就能把条带给调正。

3. 接下来是第二个按钮，Lanes，这个按钮的作用就是给 WB 图加上泳道，加了泳道后我们要根据条带的位置对泳道进行微调，使其能够更好的框出每个泳道的条带。

我们拉动左下角图中各个颜色的矩形框，通过拖动横箭头进行拉大拉小及花形箭头图标来移动，对其框选的范围进行调整。

当然在 Lanes 的工具栏下（上排中间）有 Add Lanes 和 Delete Lanes 等选项，当点击 Lanes 按钮的时候，如果不能很好的识别泳道时，可以利用这几个按钮进行添加或者删除泳道。

4. 上图中我们看到很多红色的 + 号，这些 + 号是识别条带的，我们发现软件经常不能很好的识别条带，这个时候就要用到 Bands 按钮了（上图最右上角那个窗口的第 3 个按钮），点击后就出现下图，通过 Add Bands 和 Delete Bands 可以调整需要识别的条带。

很多人作图的时候喜欢给 WB 图加上边框，就会有如下情况。

红色的 + 号特别多，密集恐惧症要犯了，删起来也很费时间，有两个解决的办法，一个是以后扫描前的图不要加边框，因为这个软件是识别灰度的，并不能很好的区别哪些是条带哪些不是，因此扫描后再加上去。

如果是已经加好边框又懒得再回 PS 改的同学，不要着急，也是有解决办法的，我们可以通过调整上图中右边的那幅图中红色峰底下的黑色【】来调整，峰图下面是条带的情况，根据目的条带的位置进行调整。

5. 接着就点 Result 按钮（下图上排中间窗口倒数第四个按钮），结果就会呈现在下图右上角的那个图中，然后上边的 IOD 值，看下边 Sum 的那一横排数值，就是各个条带的灰度扫描值了。

将这些数值录入 Graph Pad 或者 Excel 表格就可以做图和统计学分析了，有没有差异就看统计学结果啦，并不是全靠肉眼哦！

不过，如果你们是完美主义者，可以对 Lanes 和 Bands 所框选的范围不断优化，这样得出来的结果误差更加小。当然要做统计学分析是要多次实验的哦，并不是多次扫描哦。

好了，这个软件的功能就基本介绍完了，其实特别简单，快点学起来吧！