分子生物学常用试剂配置

一、分子生物学常用贮存液的配制

1、30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml.用滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。

【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。

一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。

在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。

2、40%丙烯酰胺

【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L.

【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。

3、放线菌素D溶液

【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1:10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。

【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。

4、0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液

【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃

5、10mol/L乙酸酰溶液

【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。

6、10%过硫酸铵溶液

【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。

7、BCIP溶液

【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃

8、2×BES缓冲盐溶液

【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na₂HPO₄，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。

9、1mol/L CaCl₂溶液

【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl₂·6H₂O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。

【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。

10、2.5mol/L CaCl₂溶液

【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl₂·6H₂O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

11、1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液

【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。

12、脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液

【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。

碱基	波长（nm）	消化系数（ε）[L/（mol·cm）]
A	259	1.54×104
G	253	1.37×104
C	271	9.10×103
T	260	7.40×103

比色杯光径为1cm时，吸光度=εM。

13、0.5mol/l EDTA（pH8.0）溶液

【配制方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H₂O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。

【注意】EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。

14、溴化乙锭（10mg/ml溶液）

【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。

15、2×HEPES缓冲盐溶液

【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。

16、IPTG溶液

【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

17、1mol/L乙酸镁溶液

【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。

18、1mol/L MgCl₂溶液

【配制方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl₂·6H₂O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。

【注意】MgCl₂极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。

19、β-巯基乙醇（BME）溶液

【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。

【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。

20、NBT溶液

【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。

21、酚/氯仿溶液

【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl（pH7.6）抽提几次以平衡这混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl（pH=7.6）液层，保存于4℃。

【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

22、10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液

【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。

【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。

23、磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液

【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2（1034×105Pa）高压下蒸气灭菌20min.保存于室温。

24、1mol/L乙酸钾（pH=7.5）溶液

【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20℃。

25、乙酸钾溶液（用于碱裂解）

【配制方法】在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

26、3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液

【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌。

27、5mol/L NaCl溶液

【配制方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分装后高压灭菌。

28、10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液

【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。

【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无须灭菌。

29、20×SSC溶液

【配制方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

30、20×SSPE溶液

【配制方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH₂PO4·H₂O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。

31、100%三氯乙酸溶液

【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA.

32、1mol/L Tris溶液

【配制方法】在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节pH值至所需值。

pHHCl     7.4 70ml          7.6 60ml             8.0 42ml

应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L,分装后高压灭菌。

【注意】如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris.

尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。

Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6.

33、Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）

【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4,用蒸馏水定容至1L,分装后在151bf/in2（1.034×10⁵Pa）高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存。

34、X-gal溶液

【配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。

二、常用抗生素溶液

抗生素	贮存液a	工作浓度
浓度	保存条件	严紧型质粒	松弛型质粒
氨苄青霉素	50mg/ml(溶于水)	-20℃	20μg/ml	60μg/ml
>羧苄青霉素	50mg/ml(溶于水)	-20℃	20μg/ml	60μg/ml
>氯霉素	34mg/ml(溶于乙醇)	-20℃	25μg/ml	170μg/ml
卡那霉素	10mg/ml(溶于水)	-20℃	10μg/ml	50μg/ml
链霉素	10mg/ml(溶于水)	-20℃	10μg/ml	50μg/ml
四环素b	5mg/ml(溶于乙醇)	-20℃	10μg/ml	50μg/ml

a:以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

b:镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。

三、常用的电泳缓冲液

缓冲液	使用液	浓贮存液（每升）
Tris-乙酸（TAE）	1×：0.04mol/L Tris-乙酸	50×：242g Tris碱
0.001mol/L EDTA	57.1ml冰乙酸
	100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-磷酸（TPE）	1×:0.09mol/L Tris-磷酸	10×:10g Tris碱
0.002mol/L EDTA	15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
	40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-硼酸（TBE）a	0.5×0.045mol/L Tris-硼酸	5×：54g Tris碱
0.001mol/L EDTA	27.5硼酸
	20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
碱性缓冲液b	1×:50mmol/L NaOH	1×:5ml 10mol/L NaOH
1mmol/L EDTA	2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸c	1×:25mmol/L Tris	5×:15.1g Tris
250mmol/L 甘氨酸	94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3)
0.1% SDS	50ml 10% SDS(电泳级)