沙门氏菌检验

1 主题内容与适用范围

本文规定了食品中沙门氏菌的检验方法。

本文适用于航空食品的检验。

2 设备和材料

吸管（1ml、10ml）、恒温培养箱（36±1℃、42℃）、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等

3 培养基和试剂

缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁孔雀绿增菌液、四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋琼脂（BS）、DHL琼脂、HE琼脂、WS琼脂、SS琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、靛基质试剂、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基、氨基酸脱羧酶试验培养基、糖发酵管、ONPG培养基、半固体琼脂、丙二酸钠培养基、沙门氏菌因子血清：按26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于详细分型。

4 检验程序

沙门氏菌检验程序如下：

5 操作步骤

5.1 前增菌

取检样25g，加入225mL缓冲蛋白胨水于均质杯内。用均质器以8000~10000r/min打碎1min，于36±1℃培养4h（干蛋品培养18~24h），移取10mL，转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液（MM）或四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液内，于42℃培养18~24h。同时，另取10mL，转种于100mL亚硒酸盐肮氨酸（SC）增菌液内，于36±1℃培养18~24h。

5.2 分离

取增菌液1环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个DHL琼脂平板。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于36±1℃分别培养18~24h（DHL）或40~48h（BS），观察各个平板上生长的菌落，沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙门氏菌Ⅲ在各个平板上的菌落特征见表1。

表1 沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征

5.3 生化试验

5.3.1 自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内，肠杆菌科常见属种的反应结果见表2。

表2  肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果

说明：在三糖铁琼脂内只有斜面产酸并同时硫化氢（H2S）阴性的菌株可以排除，其他的反应结果均有沙门氏菌的可能，同时也均有不是沙门氏菌的可能。

5.3.2 在接种三糖铁琼脂的同时，再接种蛋白陈水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照培养基各1管，于36±1℃培养18~24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于A1、A2和B1，其他5种反应结果均可以排除。

表3  肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表

5.3.3 反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常，则按A3判定为弗劳地氏柠檬酸杆菌。

表4

5.3.4 反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，按表5判定结果。

表5

5.3.5 反应序号B1：补做ONPG。ONPG十为大肠埃希氏菌，ONPG-为沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸+，但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸-。

5.3.6 必要时按表6进行沙门氏菌生化群的鉴别。

表6沙门氏菌属各生化群的鉴别

5.4 血清学分型鉴定

具体内容见GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》中6.4。

5.5 菌型的判定和结果报告

综合以上生化试验和血清学分型鉴定的结果，按照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》中表8或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型，并报告结果。

注：本文参照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》