微生物学实验室常用的器皿

微生物学实验室所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。一般，玻璃器皿的质量要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂烧灼而不致破损；器皿的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和包装方法的要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤方法不恰当也会影响实验结果。本节将对这几方面作详细介绍。

一、器皿的种类、要求与应用

1. 试管（test tube）

微生物学实验室所用玻璃试管，其管壁必须比化学实验室用的厚些，这样在塞棉花塞时，管口才不会破损。试管的形状要求没有翻口，不然，微生物容易从棉塞与管口的缝隙间进入试管而造成污染。此外，现在有不用棉塞而用铝制或塑料制的试管帽，若用翻口试管也不便于盖试管帽。有的实验要求尽量减低蒸发试管内的水分，则需使用螺口试管，盖以螺口胶木或塑料帽。

试管的大小可根据用途的不同，准备下列三种型号。

（1）大试管（约18×180mm）可盛倒培养皿用的培养基；亦可作制备琼脂斜面用（需要大量菌体时用）。

（2）中试管（约13-15×100-150mm）盛液体培养基或做琼脂斜面用，亦可用于病毒等的稀释和血清学试验。

（3）小试管（10-12×100mm）一般用于糖发酵试验或血清学试验，和其他需要节省材料的试验

2. 德汉氏试管（Durham tube）

观察细菌在糖发酵培养基内产气情况时，一般在小试管内再套一倒置的小套管（约6×36 mm），此小套管即为德汉氏试管，又称发酵小套管。

3. 吸管（又称移液管，pipette）

（1）玻璃吸管（glass pipette）微生物学实验室一般要准备1、5、10 ml的刻度玻璃吸管。与化学实验室所用的不同，其刻度指示的容量往往包括管尖的液体体积，亦即使用时要注意将所吸液体吹尽，故有时称为“吹出”吸管。市售细菌学用吸管，有的在吸管上端刻有“吹”字。

除有刻度的吸管外，有时需用不计量的毛细吸管，又称滴管，来吸取动物体液和离心上清液以及滴加少量抗原、抗体等。

（2）活塞吸管（piston pipette）主要用来吸取微量液体，故又称微量吸液器或微量加样器。其外形和结构如图Ⅰ-4，除塑料外壳外，主要部件有按钮、弹簧、活塞和可装卸的吸嘴。按动按钮，通过弹簧使活塞上下活动，从而吸进和放出液体。其特点是容量固定，使用时不用观察刻度，操作方便、迅速。国内产品一般每个活塞吸管固定一种容量，分别有5、10、20、25、50、100、200、500、1000 μl等不同容量。而精制的活塞吸管每个在一定的范围内可调节几个容积，例如在5-25 μl的范围内，可调节5、10、15、20、25 μl五个不同的量，使用时按需要调节，但当调节固定后，每吸一次，容量仍是固定的。用毕只需调换吸嘴或将吸嘴洗净，消毒后再行使用。

活塞吸管是国外70年代后半期才开始生产与应用的，近年来国内亦日益广泛应用于免疫学和使用同位素等的科学实验中。

4. 培养皿（petridish）

常用的培养皿，皿底直径90mm，高15mm。培养皿一般均为玻璃皿盖，但有特殊需要时，可使用陶器皿盖，因其能吸收水分，使培养基表面干燥，例如测定抗生素生物效价时，培养皿不能倒置培养，则用陶器皿盖为好。

在培养皿内倒入适量固体培养基制成平板，用于分离、纯化、鉴定菌种、微生物计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。

5. 三角烧瓶（Erlenmeyerflask）与烧杯（beaker）

三角烧瓶有100、250、500、1000 ml等不同的大小，常用来盛无菌水、培养基和摇瓶发酵等。常用的烧杯有50、100、250、500、1000 ml等，用来配制培养基与药品。

6. 注射器（injector）

一般有1、2、5、10、20、50 ml等不同容量的注射器。注射抗原于动物体内可根据需要使用1、2和5 ml的；抽取动物心脏血或绵羊静脉血可采用10、20、50 ml的。

微量注射器有10、20、50、100 μl等不同的大小。一般在免疫学或纸层析等实验中滴加微量样品时应用。

7. 载玻片（slide）与盖玻片（cover slip）

普通载玻片大小为75×25 mm，用于微生物涂片、染色，作形态观察等。盖玻片为18×18 mm。

凹玻片是在一块厚玻片的当中有一圆形凹窝，作悬滴观察活细菌以及微室培养用。

8．双层瓶（double bottle）

由内外两个玻璃瓶组成，内层小锥形瓶盛放香柏油，供油镜头观察微生物时使用，外层瓶盛放二甲苯，用以擦净油镜头。

9. 滴瓶（dropper bottle）

用来装各种染料、生理盐水等。

10. 接种工具

接种工具有接种环（inoculating loop）、接种针（inocula-ting needle）、接种钩（inoculating hook）、接种铲（inocula-ting shovel）、玻璃涂布器（glass spreader）等。制造环、针、钩、铲的金属可用铂或镍，原则是软硬适度，能经受火焰反复烧灼，又易冷却。接种细菌和酵母菌用接种环和接种针，其铂丝或镍丝的直径以0.5 mm为适当，环的内径约2 mm，环面应平整。接种某些不易和培养基分离的放线菌和真菌，有时用接种钩或接种铲，其丝的直径要求粗一些，约1 mm。用涂布法在琼脂平板上分离单个菌落时需用玻璃涂布器，是将玻棒弯曲或将玻棒一端烧红后压扁而成。

二、玻璃器皿的清洗方法

清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，因此，玻璃器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。现分述如下：

1. 新玻璃器皿的洗涤方法

新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时。酸溶液一般用2％的盐酸或洗涤液（见本小节“3”）。浸泡后用自来水冲洗干净。

2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法

(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。热的肥皂水去污能力更强，可有效地洗去器皿上的油污。洗衣粉和去污粉较难冲洗干净而常在器壁上附有一层微小粒子，故要用水多次甚至10次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗，然后倒置于铁丝框内或有空心格子的木架上，在室内晾干。急用时可盛于框内或搪瓷盘上，放烘箱烘干。

玻璃器皿经洗涤后，若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。

装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。带菌的器皿在洗涤前先浸在2％煤酚皂溶液（来苏尔）或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤。带病原菌的培养物最好先行高压蒸汽灭菌，然后将培养物倒去，再进行洗涤。

盛放一般培养基用的器皿经上法洗涤后，即可使用，若需精确配制化学药品，或做科研用的精确实验，要求自来水冲洗干净后，再用蒸馏水淋洗三次，晾干或烘干后备用。

(2)玻璃吸管吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管（包括毛细吸管），使用后应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内，免得干燥后难以冲洗干净。量筒或标本瓶底部应垫以脱脂棉花，否则吸管投入时容易破损。待实验完毕，再集中冲洗。若吸管顶部塞有棉花，则冲洗前先将吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，用水将棉花冲出，然后再装入吸管自动洗涤器内冲洗，没有吸管自动洗涤器的实验室可用冲出棉花的方法多冲洗片刻。必要时再用蒸馏水淋洗。洗净后，放搪瓷盘中晾干，若要加速干燥，可放烘箱内烘干。

吸过含有微生物培养物的吸管亦应立即投入盛有2％煤酚皂溶液或0．25％新洁尔灭消毒液的量筒或标本瓶内，24小时后方可取出冲洗。

吸管的内壁如果有油垢，同样应先在洗涤液内浸泡数小时，然后再行冲洗。

(3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5-10分钟，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗，然后在稀洗涤液中浸泡0．5-2小时，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95％酒精中保存备用。使用时在火焰上烧去酒精。用此法洗涤和保存的载玻片和盖玻片清洁透亮，没有水珠。

检查过活菌的载玻片或盖玻片应先在2％煤酚皂溶液或0．25％新洁尔灭溶液中浸泡24小时，然后按上法洗涤与保存。

3. 洗涤液的配制与使用

（1）洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下：

浓溶液 重铬酸钠或重铬酸钾（工业用） 50 g

自来水 150 ml

浓硫酸（工业用） 800 ml

稀溶液 重铬酸钠或重铬酸钾（工业用） 50 g

自来水 850 ml

浓硫酸（工业用） 100 ml

配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温，使溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。

配好后的洗涤液应是棕红色或桔红色。贮存于有盖容器内。

（2）原理 重铬酸钠或重铬酸钾与硫酸作用后形成铬酸（chro-mic acid），酪酸的氧化能力极强，因而此液具有极强的去污作用。

（3）使用注意事项

（a）洗涤液中的硫酸具有强腐蚀作用，玻璃器皿浸泡时间太长，会使玻璃变质，因此切忌到时忘记将器皿取出冲洗。其次，洗涤液若沾污衣服和皮肤应立即用水洗，再用苏打水或氨液洗。如果溅在桌椅上，应立即用水洗去或湿布抹去；

（b）玻璃器皿投入前，应尽量干燥，避免洗涤液稀释；

（c）此液的使用仅限于玻璃和瓷质器皿，不适用于金属和塑料器皿；

（d）有大量有机质的器皿应先行擦洗，然后再用洗涤液，这是因为有机质过多，会加快洗涤液失效，此外，洗涤液虽为很强的去污剂，但也不是所有的污迹都可清除；

（e）盛洗涤液的容器应始终加盖，以防氧化变质；

（f）洗涤液可反复使用，但当其变为墨绿色时即已失效，不能再用。

三、空玻璃器皿的包装

1. 培养皿的包装

培养皿常用旧报纸密密包紧，一般以5-8套培养皿作一包，少于5套工作量太大，多于8套不易操作。包好后行于热灭菌。如将培养皿放入铜筒内进行干热灭菌，则不必用纸包，铜筒有一圆筒形的带盖外筒，里面放一装培养皿的带底框架，此框架可自圆筒内提出，以便装取培养皿。

2. 吸管的包装

准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0．5cm处，塞一小段约1．5cm长的棉花，以免使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。棉花要塞得松紧恰当，过紧，吹吸液体太费力；过松，吹气时棉花会下滑。然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的近左端，与报纸约呈45度角，并将左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打一小结。如此包好的很多吸管可再用一张大报纸包好，进行干热灭菌。

如果有装吸管的铜筒，亦可将分别包好的吸管一起装入铜筒，进行干热灭菌；若预计一筒灭菌的吸管可一次用完，亦可不用报纸包而直接装入铜筒灭菌，但要求将吸管的尖端插入筒底，粗端在筒口，使用时，铜筒卧放在桌上，用手持粗端拔出。

3. 试管和三角烧瓶等的包装

试管管口和三角烧瓶瓶口塞以棉花塞（做棉塞的方法见实验十九），然后在棉花塞与管口和瓶口的外面用两层报纸（不可用油纸）与细线包扎好，进行干热灭菌。试管塞好棉花塞后也可一起装在铁丝篓中，用大张报纸将一篓试管口做一次包扎，包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。

空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若需湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎，外面最好再加一层牛皮纸。如果试管是盖的铝帽，则不必包纸，可直接干热灭菌。用塑料帽，则宜湿热灭菌。