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中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)

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实验目的

1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。

2.通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。

实验原理

血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞,通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤,能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微 生物 等异物,是机体非特异性免疫的重要组成部分。

实验材料

1.葡萄球菌18h孵育的斜面或肉汤培养物。

2.抗凝人血(3.8%枸橼酸钠一滴加于无菌小 试管 中)、瑞氏染液、双蒸水

3. 试管 、玻片、采血针、酒精棉球、吸管、滴管、显微镜、香柏油

实验方法

1.取小试管一支,用滴管加入一滴3.8%枸橼酸钠溶液。

2..用酒精棉球消毒手指和采血针,从消毒部位采取2~3滴血加入试管中。

3..取一滴菌液加入小试管中,用吸管混匀。

4.置37℃ 水浴 箱 水浴 15分钟,中途混匀一次。

5. 取出小试管,用吸管将试管中血液打匀后取血半滴于载玻片上,用另一载玻片推成薄血片。

6.待血片自干后,用瑞氏染液染色。

瑞氏染色法:取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。然后加等量 蒸馏 水,

轻轻晃动混匀,继续染5分钟,水洗,用吸水纸吸干后镜检。

结果观察

油镜检查:寻找中性粒细胞,如果染色结果正确,可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色,而粒细胞的细胞浆则为淡红色。

中性粒细胞吞噬试验

计数:

1.吞噬百分率:观察100个中性粒细胞,计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数,计算出吞噬细胞百分率。

2.吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计算其中被吞噬的细菌总数,平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。

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