人乳腺癌的裸鼠移植模型的制作
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HBC裸鼠移植模型的建立包括活检取材的HBC标本和细胞株,后者应用较广泛。本贴主要讨论后者,算是抛砖了!
1、人乳腺癌细胞株的选择
目前人乳腺癌细胞建株的癌细胞较多,本人曾接触过细胞株总结如下:
ER(+):MCF-7(来源:乳腺腺癌),ZR-75-30(乳腺导管癌),T47D(乳腺导管癌),ZR-75(乳腺腺癌)。
ER(-):MDA-MB-435s(乳腺导管癌),MDA-MB-435(乳腺导管癌),SK-BR-3 (乳腺腺癌),MDA-MB-231(乳腺腺癌),MDA-MB-453(乳腺腺癌)。
作为乳腺癌细胞移植裸鼠的选择,本人推荐:ER(+)选用MCF-7和ZR-75-30;ER(—)选用MDA-MB-435s和MDA-MB-231。这几株细胞成瘤率较高。
2、提高移植成功率
①将HBC细胞植入裸鼠的乳房脂肪垫(Mammary fad pat,mfp),又称原位移植(相反则称异位移植),不仅可以提高乳腺癌细胞的成瘤率而且可以增加转移的发生率。
②促进肿瘤细胞在裸鼠体内形成肿瘤的方法是将癌细胞和Matrigel或成纤维细胞混合后注入裸鼠体内。Matrigel是由层粘连蛋白、Ⅳ型胶原纤维、硫酸乙酰肝素和巢蛋白组成的混合物,在4℃为液体,而在37℃则聚合形成一种凝胶。
③裸鼠的选择
Balb/c、 nu/nu雌性裸鼠 (SPF级),4-6周龄,体重18-22g,预实验选用Balb/c小鼠,用于mfp的解剖。
MDA-MB-435S细胞的成瘤情况
3、材料
常规器械:15号小圆刀、小刀柄、1ml,5ml空针、橡筋、定鼠板、钉子、止血钳、眼科剪、口罩帽子手套;
药品准备:安氟醚、NS、酒精、脱毛剂(硫化钠)、肾上腺素;
显微外科器械:8倍目视显微镜或16倍台式显微镜、显微手术器械(组织剪、持针器、镊子)、50ul微量注射器(检验系用);
小鼠解剖准备:BALB/C小鼠(清洁级);
饲养条件准备:鼠笼、饲料、水杯;
脱毛剂配方:硫化硷10g、生石灰15g、40%酒精100ml。
操作注意事项:
①特别注意:进针后准确、缓慢注入裸鼠乳腺脂肪垫内,万不可让细胞溢出脂肪垫;
②注射剂量、进针深度、角度、注射器推进速度;
③对注射癌细胞后的裸鼠当病人认真对待,认真做好病程记录:生命体征、体重、活动度、食量、饮水量等。