制备多克隆抗体免疫方案及免疫效价的检测

抗原注射途径可根据不同抗原及试验要求，选用皮内、皮下、肌肉、静脉或淋巴结内等不同途径注入抗原进行免疫。一般常采用背部、足掌、淋巴结周围、耳后等处皮内或皮下多点注射。初次免疫与第二次免疫的间隔时间多为2～4周。常规免疫方案为抗原加CFA皮下多点注射进行基础免疫；再以免疫原加IFA作2～5次加强免疫，每次间隔2～3周，皮下或腹腔注射加强免疫。完成免疫程序后，先取少量血清测试抗体效价达到要求时，即可从动物心脏穿刺(豚鼠及家兔)，颈静脉或颈动脉放血(家兔、羊及马匹)。待血液凝固后，离心沉淀分离出血清，加入0.1%叠氮钠作为防腐剂。以可溶性蛋白抗原免疫家兔为例，具体免疫方案如下。

主要材料和试剂

1. 健康雄性家兔3只；体重2.5Kg左右，4～5周龄

2. CFA和IFA；

3. 抗原（纯化人血清免疫球蛋白）

4. 无菌注射器，平皿

5. 刻度吸管，毛细吸管，研钵

免疫方法

按每只家兔取纯化抗原1mg用1～2ml PBS或生理盐水稀释，加等体积CFA充分乳化后，于家兔背部及后腿肌肉、皮下多点注射。第一次免疫后间隔1～2周再以相同抗原1mg/1ml加等体积IFA乳化后，注入后腿肌肉或背部皮下多点加强免疫。尔后每隔2～3周按第二次免疫法重复加强免疫。每次免疫后7～14d抽取少许静脉血，分离血清，以备检测免疫效果。于第4次免疫后5～7d试血。

免疫效价的检测

于家兔耳静脉取血1～2ml，分离血清。用环状沉淀试验测定抗体效价达1：5000以上(稀释抗原)，或用琼脂双向扩散试验测定抗体效价达1：16以上(稀释抗体)，即可从心脏或颈动脉放血，或静脉采血，分离血清，进行抗体的纯化及检测。