细胞转染后抗生素选择

zhangcy2004问：

细胞转染后建立稳转细胞系大多用G418来杀，可是这种抗生素的选择是根据什么来确定的呢？还可以用其他的抗生素吗？

如果一个载体上有两个抗生素基因，氨苄青霉素和新霉素，那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来杀细胞呢？刚结束这方面的知识，不甚了解，恳请高手指点迷津！非常感谢！

丁香园网友alfredyu2004认为：

虽然我也是不是太清楚，但是应该看转染是细菌还是细胞

氨苄青霉素是来选细菌的，大肠杆菌。

新霉素是选细胞的，哺乳动物细胞。

丁香园网友wangbadan认为：

标有neo（实际上应该是neo resistance）的载体，指载有降解新霉素的基因，新霉素作用于原核和真核细胞，对两者都有杀伤作用。用于转染后，稳定表达外源基因细胞的阳性筛选。

标有amp（实际上应该是amp resistance）的载体，指载有降解氨苄青霉素的基因（β－内酰胺酶），作用于原核细胞，只对敏感菌有作用。用于克隆菌的筛选。

除此之外，用于克隆菌的筛选的还可能有氯霉素（标有Cm），卡那霉素（标有kana）；

用于阳性细胞筛选的还可能有潮霉素（标有Hyg），等等。。。

所以不管是做细菌克隆，还是其后的做细胞表达都要根据载体的说明选择相应抗生素，不是可以随便用的。

做细胞表达时，如果只是要求短时表达（即所谓瞬时转染），可不必用细胞抗生素。

丁香园网友mikke_2000认为：

应该是质粒转染细胞，筛选出稳定表达新基因的细胞系吧。筛选所选用的抗生素是跟你转染所用的质粒上所带的真核筛选抗性基因有关的。最常见的载体上带有新霉素抗性基因neo，所以筛选的时候用G418，如果带有嘌呤霉素的抗性基因就要选用puro。另外如果双转染，要考虑到两种质粒的筛选抗性的兼容。G418等的筛选浓度最好也用预试验摸一下~~