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流式细胞术中的几点注意事项

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一、对照组的设置:

在流式细胞术中所测得的量都是相对值,不是绝对值。如需知道绝对值 时必须设置对照组样品。对照组样品包括有阴性对照和阳性对照。

1. 阴性对照的设置

① 在实验过程中,如做间接标记法,可设置与一抗无关的实验,即在 实验中不加一抗而只加上带有荧光标记的第二抗体作为阴性对照 管,作为阴性对照。

② 在实验过程中,假设做直接标记法,可设置理论上的阴性细胞作为 阴性对照管, 实验过程及步骤与实验组务必相同。 (做间接标时记,法 同样也可同时设置“阴性细胞”的阴性对照管作为阴性对照。

③ 在实验过程中,假设做直接标记法,可将实验组细胞,取一管,加上与实验抗体所标记的荧光颜色相同的同型对照来作为阴性对照。

2. 阳性对照的设置:

在实验过程中如涉及到表达缺失或减少的实验,应设置阳性对照组,其设置方法与阴性对照设置相同。

二、几点建议:

1. 在实验过程中,在保证实验的科学性和准确性的基础上,应尽量减少实验工 序和过程。由于间接标记法的工序多,实验过程长,如再加之操作的不熟练, 细胞更容易丢失和受损,而造成实验结果的误差。因此,在条件允许的范围 内,建议尽量做直接标记法而不去做间接标记法,以保证实验的真实性和准 确性。

2. 建议送检细胞一定要足够量,一般要求 1×106 个细胞。不要过少。因为,如 细胞太少检测时样本流量相对会增大从而影响变异系数,结果也不可信。细 胞量也不宜过多,因细胞量太多加入的抗体或染料相对不足,结果也由此受影响。

3. 同一种细胞需同时做双标记时,须做双标记的同型对照,且两种抗体所标记 的荧光颜色务必不同。


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