实验室常用实验生物试剂的配制大全

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实验室常用试剂的配制：无Ca2+、Mg2+ Hanks液、Hanks液(原液)、甲基红试剂、0.4%酚红溶液、pH7.2 Tris-NH4CI溶液(红细胞崩解液)、0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液、磷酸盐缓冲液 (PBS )、0.1mol/L PH8.4 硼酸缓冲液(BBS)、0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液、0.01mol/L pH7.4 PBS内含2%BSA(牛血清白蛋白)、底物溶液、清洁液的配制、柯氏试剂(靛基质试剂)。

1. 无Ca2+、Mg2+ Hanks液

NaCl 4.5g

KCl 0.2g

NaHCO3 0.175g

Na2HPO4·12H2O 0.076g

KH2PO4 0.03g

葡萄糖 0.5g

0.4%酚红 2.5ml

将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO3 调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。

2. Hanks液(原液)

原液甲： NaCl 160g

KCl 8g

MgSO4·7H2O 2g

MgCl2·6H2O 2g

上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。

CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水

上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

原液乙： Na2NPO4·12H2O 3.04g

KH2PO4 1.2g

葡萄糖 20g

加入800ml双蒸水，溶解。

0.4%酚红溶液100ml

上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

使用时甲,乙原液按下列比例配成 Hanks液 使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3调整PH值。

3.甲基红试剂

(1)成份

甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml

95%乙醇 300ml

(2)用途：测定甲基红反应。

4.0.4%酚红溶液

称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。

5.pH7.2 Tris-NH4CI溶液(红细胞崩解液)

Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g

NH4Cl(氯化氨) 3.735g

加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。

6.0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液

巴比妥 1.84g

加蒸馏水 200ml 加热溶解

巴比妥纳 10.3g

叠氮纳 0.2g

加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。

7.磷酸盐缓冲液 (PBS )

A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH2PO4 · H2O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最后补加蒸馏水至 1000ml 。

B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na2HPO4.7H2O 3.6g(或 Na2HPO4·12H2O 71.6g, 或Na2HPO4 · 2H2O 35.6g ), 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。

8.0.1mol/L PH8.4 硼酸缓冲液(BBS)

硼酸钠(Na2B4O7.10H2O) 0.46g

硼酸(H2BO3) 0.51g

加蒸馏水至100ml 溶解。

9.0.01mol/L PH7.4 磷酸盐缓冲液(PBS )

配制方法一：

0.2mol/L Na2HPO4( Na2HPO4·12H2O 71.6g加蒸馏水至1000ml)

0.2mol/L NaH2PO4(NaH2PO4·2H2O 35.6g加蒸馏水至1000ml)

取0.2mol/L Na2HPO4 81.0ml 加0.2mol/L NaH2PO4 19ml,再加1900mlH2O和17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS 。

PH7.4 0.01mol/L PBS 再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。

配制方法二：

甲液(0.1mol/LKH2PO4溶液)：KH2PO413.608g，加蒸馏水至1000ml。

乙液(0.1mol/L Na2HPO4溶液)：Na2HPO435.814g，加蒸馏水至1000ml。

取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。

10.0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液

Na2CO3 1.59g

NaHCO3 2.93g

加蒸馏水至1000ml。ELISA实验包被用。

11.0.01mol/L pH7.4 PBS内含2%BSA(牛血清白蛋白)

取BSA2ml加0.01mol/L pH7.4PBS至100ml即可。ELISA实验封闭用。

12.PH5.0 磷酸-柠檬酸缓冲液

0.2mol/L Na2PO4(28.4g/L) 25.7ml

0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L) 24.5ml

加蒸馏水至100ml即为pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。

13.底物溶液

pH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液加入邻苯二胺1mg/ml，再加入30%的H2O2 (1μl/ml)溶解后即为ELISA底物液，临用前配制，避光保存。

14.2mol/L 硫酸

浓H2SO4(36N)取 1ml36N的H2SO4缓缓加入18 ml蒸馏水内即为2mol/L，用于ELISA实验终止反应。

15.清洁液的配制

清洁液分高、中、低液三种。

低浓度清洁液

重铬酸钾 100g

水 750ml

硫酸 250ml

中浓度清洁液

重铬酸钾 60g

水 300ml

硫酸 460ml

高浓度清洁液

重铬酸钾 100g

水 200ml

硫酸 800ml

先将重铬酸钾倒入自来水中，然后加入浓硫酸，边加硫酸边用玻璃棒搅拌。由于加入浓硫酸后产生高热，故加酸时要慢，溶器应用耐酸耐高温塑料或陶器制品。

配制好的清洁液，应存于有盖的玻璃溶器内。需要浸泡的玻璃器皿一定要干燥，如果清洁液经过长期使用已呈黑色，表明已经失效，不宜再用。由于清洁液有强腐蚀性，故操作时要十分注意。

16.柯氏试剂(靛基质试剂)

(1)成份

纯戊醇 150ml

浓盐酸 50ml

对二甲基氨基苯甲醛 10g

(2)制法：将对二甲基氨基苯甲醛加入纯戊醇内，使其溶解。将浓盐酸一滴滴慢慢加入，边加边摇，不能加得太快，以致温度升高溶液颜色变深。

(3)用途：测定细菌能否产生吲哚。

17.PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸盐缓冲盐水(PBS)

(1)l/l5mol/ml 磷酸二氢钾溶液

KH2PO4 9.04g

蒸馏水 加至1000ml

(2)l/l5mol/ml 磷酸氢二钠溶液

Na2HPO4·2H2 O 11.87g

(或 Na2HPO4·l2H2 O 23.86g

蒸馏水 加至1000ml

(3)PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸盐缓冲盐水(PBS)

l/l5mol/ml磷酸二氢钾溶液 73ml

l/l5mol/ml磷酸氢二钠溶液 27ml

NaCl 0.5g

混匀溶解即可。

磷酸盐缓冲液可用于细胞培养、ELISA检测、免疫组化、有机溶剂等实验中，主要是作用防止溶液pH变化和溶剂，磷酸盐缓冲液试剂主要由有氯化钠、磷酸盐、磷酸盐、氯化钾和磷酸钾组成。