嗜酸性粒细胞的分离

嗜酸性粒细胞在支气管哮喘、过敏性鼻炎等发病过程中起重要作用，研究其功能需要制备高纯度和高活力的嗜酸性粒细胞。以下介绍一种根据中性粒细胞膜选择性表达FcγRIII（CD16），采用包被有抗CD16单克隆抗体的磁珠，通过负性选择方式快速简便的分离脐血嗜酸性粒细胞的方法。

试剂及配制

1. 各种比重的聚蔗糖-泛影葡胺分离液
A液：12% 比重1.090的聚蔗糖-泛影葡胺分离液
B液：9.0% 比重1.076的聚蔗糖-泛影葡胺分离液
C液：6.4% 比重1.065的聚蔗糖-泛影葡胺分离液

2. 6%葡聚糖

3. 抗CD16的免疫磁珠

4. 0.01mol/L PBS

操作方法

1. 取以0.1mol/L，pH7.7 EDTA抗凝的新生儿脐血100ul，加嗜酸性粒细胞染液0.9ml，进行计数后，其余血液按1:5比例加入6%葡聚糖，混匀置37℃ 水浴40min，取上清离心，浓缩待用；

2. 依次缓慢加入各种比重的聚蔗糖-泛影葡胺分离液A液、B液、C液以及待分离的白细胞浓缩液，2000r/min离心20min，细胞分成上、中、下和底部4层，吸出富含嗜酸性粒细胞的下层，用0.01mol/L PBS洗2次并计数细胞总数；

3. 每107 个细胞加4℃预冷的抗CD16免疫磁珠20ul，混匀，6～12℃保持15min，2次通过置于磁珠分离器（MACS）强磁场中的分离柱。与抗CD16免疫磁珠结合的中性粒细胞则被阻滞于分离柱内，而未标记的嗜酸性粒细胞流出柱口；

4. 嗜酸性粒细胞用0.01mol/L PBS洗1次，其中混有少量红细胞，用0.83%氯化铵溶解除去。以上每一步均作嗜酸性粒细胞染色计数，最后用台盼蓝拒染法观察细胞活力。

~undefined_该法分离纯化得到的脐血嗜酸性粒细胞平均纯度、获得率和活力均较高，分别为97.2%、60.7%和97%以上，因采用负性选择方式，故纯化的嗜酸性粒细胞功能几乎不受影响