斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）

基本原理

斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上，改用胶体金标记物代替酶，省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜（NC膜）为载体，将试剂及标本滴加在膜上，通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成，阳性结果在膜上呈红色斑点。

试剂及材料

1. 渗滤装置：为一塑料小盒（4x3x0.6cm），分为底、盖两层，盖的中央有一个直径0.5cm的小孔。盒底充填吸水性较强的垫料，盖孔下，紧贴垫料放置一片NC膜。紧闭盒盖，即为渗滤装置。在孔中的NC膜上点加1-2ml特异性抗体(一抗)或抗原，室温自然干燥，保存于放干燥剂的密封塑料袋中备用。

2. 封闭液：含0.2%BSA和0.05%吐温-20的洗涤液。

3. 洗涤液：50mol/L，pH7.2 PBS。

4. 特异性抗体(一抗)或抗原

5. 金标抗体

操作方法

1. 取出渗滤器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（约100ml）封闭液；

2. 待其渗入盒内，在NC膜上，加待检标本1滴（约50ml）；

3. 待其渗入盒内，在NC膜上，滴加2滴（约100ml）洗涤液；

4. 待其渗入盒内，在NC膜上，加金标抗体1滴（约50ml），使其与NC膜上吸附的检品发生反应；

5. 待其渗入盒内，在NC膜上，滴加2滴（约100ml）洗涤液；

6. 至洗涤液完全渗入盒内

结果观察

在小孔NC膜上出现红色反应时为阳性反应，阴性反应不着色。

注意事项

1. 特异性抗体(一抗)或抗原、待检标本和金标抗体的用量事先都必须应用方阵法确定最适用量。

2. 盒底充填的垫料吸水性要强，否则影响结果。