帕金森病动物模型制备

为模拟人类PD，理想的动物模型应具备以下一些特点：

(1)多巴胺能神经元在出生时数量及形态正常，青年时期开始逐渐选择性地减少，减少量超过50％，且容易通过神经化学和神经生理学的方法检测到；

(2)模型应能容易检测其运动功能的损伤，包括运动迟缓、肌僵直和静止性震颤等PD的主要症状；

(3)模型应能显示出路易小体的形成；

(4)如果模型是遗传性的，应基于单一突变而使突变模型有着强大的传播能力；

(5)模型应有相对较短的疾病周期(如数月)，以使药物筛选得以经济、快速地进行。

国际通用国内应用较多是两种方法：

①通过在大鼠的黑质或内侧前脑束注射6羟多巴胺（6-OHDA）

②通过对模型动物(如:猴、小鼠、猪等)进行1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTR）的管饲法和立体定位注射等方法。前者是较精典的模型制备的方法，也是在国内较早开展的，但是其存在：

1)神经元的毁损出现的较早，这与临床PD病人的中脑黑质多巴胺能神经元的渐进性死亡不同

2)近距离的毁损很难把握毁损的程度，这使得采用这种方法获取部分损毁的模型的成功率很低；较之前者采用MPTP管饲法和立体定位注射方法，在国内最近几年才运用到帕金森动物模型的制备。

国外已经利用MPTR在猴和小鼠身上建立了较为理想的PD模型，制备通常采用皮下、静脉、腹腔注射和肌肉给药，具有方法可靠且重复性较好。但是其危险性较高，对于试验人员和试验条件有着严格的要求。

1、模型鼠制备

1968年Ungenstdet首先报道采用6—经多巴胺(6-OHDA)在大白鼠造成帕金森病动物模型．该动物旋转模型的某些特点和人类贼金森病相似。近来，人们根据6—OHDA的注射部位及注射剂量不同，来造成模拟不同阶段帕金森病的动物模型。

注射6-OHDA来制备帕金森病鼠的步骤：

1）实验选择体重250~300g健康雄性Wistar大鼠36只来制备帕金森氏病的大鼠模型

2）大鼠用戊巴比妥（48mg/kg）腹腔注射注射麻醉

3）解剖操作 将麻醉后的大鼠固定于江湾I型C立体定向仪上，头部正中切口，剥离骨膜，止血。参照George图谱，用牙科钻在颅骨顶钻孔，定位坐标为：门齿与耳杆平行，前囱后3mm，旁开3.0mm，颅骨表面下9.0mm，将自制同心套管插入右侧NS区(套管外径0.7mm，内管外径0.4mm，内管比外管前端1.5mm,用502胶和自凝牙托粉固定。

4) 微量注射器吸6-OHDA溶液4μL(含9.0μg 6-OHDA和8.8μg抗坏血酸)，速度为1μg／min，注射后留置4min退出，缝合皮肤。

5) 21天参照参照Francois的实验方法 (包括行动迟缓实验、抓握实验和尾强直实验记录强直症状的变化、震颤实验)记录帕金森氏病的三大症状．并记录肌电图变化，以鉴别大鼠模型建立是否成功。

判断标准如下：①出现行动迟缓实验持续35min②抓握实验持续55 min、尾强直实验持续30min③震颤频率在48次／min以上和肌电图群放电位频率在4-8次／s。

2、应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型

1) 雄性Sprague-Dawley大鼠，体重230一250g

2) 实验动物经戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后，固定于立体定向仪(江湾I型C)上。

3) 参照大鼠脑立体定位图谱,取两个靶点a点:前囟尾侧5.0mm，中线右侧1.9mm,硬脑膜腹侧7.4mm；b点：前囟尾侧5．3mm，中线右侧2.5mm,硬脑膜腹侧6.5mm)。将12μg 6-OHDA(Sigma公司)立体定向注射于右侧黑质a、b两个靶点(每点注射量6μg，浓度2μg／μl，溶解于含0.1%抗坏血酸的生理盐水中)。注射速度0.3μl／min．注毕留针15min。

4) 行为检测 模型建立3周后，用阿朴吗啡(apomnphine，APO)按0.25mg／kg诱发大鼠向左侧(未损伤侧)旋转，记录半小时内旋转次数，选210转／30min(7转／min)以上的动物为成功PD模型

应用1-甲基-4-苯基－1,2,3,6四氢吡啶制备PD动物模型

3、灵长类PD模型

恒河猴在戊巴比妥(40mg／kg)腹腔麻醉下，切开颈部皮肤，经钝性分离暴露一侧颈总动脉。对动物行颈总动脉注射，即将新鲜配制的MPTP(Sigma)按1.0—1.5mg／kg体重溶于2mL生理盐水中，逆血流方向缓慢注入血管中。

若动物在第1次手术后PD症状不明显，故分别在每隔5d后又给予第2—4次注射，直至PD症状出现。用MPTP建立的灵长类双侧及偏侧PD模型，在症状、体证、病理、生化、对药物治疗的反应方面与人类PD的特征极为相似，被认为是最具代表性的PD动物模型。

4、MPTP用于帕金森病小鼠模型制作

小鼠对MPTP的敏感性存在种系和年龄的差异。一般选10~12周龄，体重25~30g成年C57BL褐鼠，按体重30~40 mg／kg腹腔注射MPTP，连续7d。于第6~7次注射后出现暂时性(2~3h)躯干震额、竖毛、尾巴过伸、动作减少及爬杆试验障碍。