酵母核糖核酸的提取及组分鉴定

一、目的

了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。

二、原理

酵母核酸中RNA含量较多，DNA少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，加入乙醇可使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA粗制品。

三、器材

1．干酵母粉

2．天平

3．烧杯

4．抽滤瓶

5．布氏漏斗

6．移液管

7．玻棒

8．pH试纸

9．离心机

四、 试剂

1．0.2%NaOH溶液

2．乙酸（A.R）

3．95%乙醇

4．无水乙醚（C.P）

5．氨水（C.P）

6．10％H 2 SO 4 溶液

7．5％AgNO 3 溶液：

5g AgNO 3 溶于蒸馏水，定容至l00ml，贮于棕色瓶中。

8．苔黑酚一三氯化铁 试剂

9．定磷试剂

五、操作

１．RNA的提取

称取４g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸 水浴 中加热30min并经常搅拌。加数滴乙酸，使提取液呈酸性。4000r/min离心10～15min ，取上清夜，边搅边搅拌边加入95%乙醇洗涤两次，无水乙醚洗两次后，将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤，干燥后即得粗RNA。

２．鉴定：

取上述粗RNA0.5g，加10%H 2 SO 4 溶液5ml，加热至沸1～2min，制得RNA水解液。

（１）嘌呤碱：

取水解液2ml，加氨水2ml，5％NaOH溶液，观察是否产生絮状嘌呤碱的银化合物。

（２）核糖：

取水解液0.５ml，加苔黑酚-FeCI 3 ；试剂1ml，加热至沸1min，观察颜色变化。

（３）磷酸：