植物组培操作程序以及选用实验仪器
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一、培养基配制的操作程序
1.加琼脂和无离子水至定容量的70%左右,加热使琼脂溶解;
2.琼脂溶解后,加入培养基母液、激素、糖等,稍加热使糖溶解;
3.糖溶解,加无离子水至定容量;
4.充分搅拌后,测pH值至要求值;
5.培养基分装入瓶后灭菌。
二、组培玻璃器皿的选择和清洗
1.玻璃器皿的选择
(1)试管—适合于初代培养、用少量培养基及试验各种不同配方时选用。
(2)三角锥瓶—适用于各种培养(如固体培养、液体培养、大规模培养或一般培养)。
(3)L形管和T形管—为专用的旋转式液体培养试管。
(4)培养皿—适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。
(5)角形培养瓶和圆形培养瓶—适用于液体培养用,如单细胞和原生质体的浅层培养。
(6)果酱瓶—常用作组培苗大量繁殖用的培养瓶。
(7)兰花瓶—适于蝴蝶兰、大花蕙花等兰花的组培苗大量繁殖用的培养瓶。
2.玻璃器皿的清洗
(1)清洗玻璃器皿用的洗涤剂有肥皂、洗洁精、洗衣粉、和铬酸钾洗涤液。
(2)清洗时先将器皿中的残渣除去,用清水洗净,再用热的肥皂水或洗洁精洗净,清水冲洗干净后用蒸馏水冲洗一次,干后备用。
(3)洗净的玻璃器皿应透明发亮、内外壁水膜均匀,不挂水珠。
三、组培常用设备和器材
1.高压蒸气灭菌锅:用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。
2.超菌工作台:用于培养物的无菌操作。(由鼓风机、滤板、操作台、紫外灯和照明灯组成)
3.接种工具:包括双筒实体显微镜、镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯或电热灭菌器等。
4.培养设备:包括空调机、定时器、温度控制器、增湿机或去湿机、培养架、摇床或旋转床、日光灯、光照培养箱等。
5.化学实验及分析设备:包括天平、酸度计、蒸馏水器、烘箱或玻璃仪器烘干器、电炉、药品柜、冰箱、晾干架等。