如何提高U251的转染效率
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问:
手上有U251细胞,pEGFP载体,现在将不带外源基因的载体转u251的效率都很低,10%都没有。
所用转染试剂:invitrogen的Lipofectamine 2000和威格拉斯的Vigofect,效率都很低,试过不同细胞密度,不同的DNA和转染试剂的比值,还是不行。
各位高人有没有什么建议,另外转染的时候使用有血清的培养基养细胞,不知道影响大不大(说明书上说没有影响),稀释DNA和转染试剂是无血清的培养基,还有就是细胞是很久以前的了,传代较多不知道行不行。
答:
lipo最好是用optiDMEM,不过我没用过,感觉也可以。
建议你转染时用无血清培养液,我是转染前半小时把细胞换无血清培养液孵育,然后lipo和质粒同体积分别和无血清培养液混匀10min后,再混匀30min,加入细胞。5h后换回正常培养液。
细胞密度要控制好,状态要好,可以在传代后1-2天,这样密度状态都比较好。
lipo不可冻
用无血清培养液
具体孵育时间视细胞而定,但感觉如果5h转不进,估计很麻烦。当然我有个同学还孵育一夜的,因为细胞抵抗力强,根据细胞调整。