转染细胞不表达怎么办

问：

最近做细胞转染，预筛选稳定克隆，载体为pEGFP-N1，pIERS

现在是平行做几个基因，转然后，只有空载体和一个基因可以看到绿色荧光，其余均没有，这会是什么原因呢？怎么补救啊？

答：

需要考虑的问题有：

1.你的细胞和转染的方法，是不是你的细胞本身就很难转染，有些细胞用脂质体转染率很低的。在求助时最好告知细胞和具体的转染方法和试剂。

2.质粒的纯度和质量：看你使用那种试剂盒提取的，我们的经验是使用QIAGEN比国产的一些试剂盒差别很大。

3.pEGFP-N1可用来表达融合蛋白，如果你插入的目的基因带终止密码子的话，这时候如果转让率很低的话没有绿色荧光，只有空载有绿色荧光，但是在转染293T时我们发现带终止密码子的载体还可以见到荧光，但比空载明显弱许多，不像空载体一样所有的细胞都带GPF。所以，不知你克隆时目的基因是否带有终止密码，如果去掉终止密码子也要注意是否发生移码错位。