鱼类胰蛋白酶的提取与活性

问：我用pH7.0 5mMTris-HCl缓冲液，含5mMCaCl2、0.02％叠氮化纳、0.5MNaCl，在4℃条件下提取黄鳝胰蛋白酶。具体方法是先将内脏打碎，离心，再用BAEE作底物在25℃，247nm处测胰蛋白酶活性，总是无功尔返。

不知道胰蛋白酶跑哪里去了，是酶失活还是自溶了，甚至是根本就没有分泌胰蛋白酶，怎样进一步保持酶的活性，恳请各位多多指教！本人不胜感激！

答：原因分析如下：

1、可能自溶。胰蛋白酶的pH3.0时最稳定，可在低温下贮存数周而不丧失活性；低于此pH时酶容易变性，当高于pH5.0时，酶容易自溶而失去活性。不知道mhyuer904 兄用pH对多少抽提液进行抽提的。最好用pH2.5～3.0的抽提液进行抽提，并且抽提的温度应该控制在0～5℃。也有可能是胰蛋白酶的激活出现问题，激活温度太高？

2、是不是应该在253nm下测定吸收，BAEE被胰蛋白酶水解后生成BA，BA在253nm处吸收远大于BAEE，专一性比较强。

3、酶激活过程中，应该严格控制反应的最适pH7.8～8.0。

答：不直到你哪儿能不能查到相关的文献，我先提供两篇吧，希望对你有用（其实胰蛋白酶没有激活剂也可以自身活化）