交叉配血-凝聚胺法

交叉配血-凝聚胺法：

1.原理

凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷。

缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。

2.标本采集

2.1标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清（浆）和红细胞悬液。

2.2标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。

3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。

4.标本运输：室温运输。

5.标本拒收标准：细菌污染。溶血标本，标签不齐全不能作测定。

6.试剂

6.1试剂名称：凝聚胺试剂（polymatching）

6.2试剂生产厂家：（台资）珠海贝索生物技术有限公司。

6.3试剂组成：

试剂1.低离子介质（LowLonicMedium，LIM）。试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-10度贮存，有效期为2年。

试剂2.凝聚胺溶液（PolybreneSolution）。贮存及有效期同上。

试剂3.重悬液（ResuspendingSolution）。贮存及有效期同上。

试剂4.8.5％生理盐水。

7.仪器

7.1血型血清索离心机：XTL-4.7上海离心机械研究所

7.2离心机：上海手术器械厂

7.3电热恒温水箱：北京长源实验设备厂

7.4显微镜：OLYMPUS（日本）

8.操作步骤及结果判断：

8.1供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。主管：受血者血清+供者红细胞悬液；次管：受者红细胞悬液+供者血清；（阴阳对照管另设）医学`教育网搜集整理。

8.2各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴，混匀，置室温15秒。

8.31000g（3000rpm），离心18秒，弃上清液，管底保留约2滴液体。轻摇

试管，观察是否形成凝块。如未形成凝块，则重做前面试验。

8.4加入2滴重悬液，轻轻混合，肉眼或显微镜下观察结果。

8.5凝块在1分钟内分散，试验结果为阴性，供受者血液配合；反之，如依照为不同强度的凝块，试验结果判为阳性，供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。

9.操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度较高，重复性好。

10.超出范围结果处理：

10.1细胞自凝：在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性；遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。

10.2若病人血清（血浆）含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。

10.3红细胞悬液为5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。

10.4各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。

11.方法局限性：

11.1试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

11.2操作方法应按规定，先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

11.3离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。

11.4观察时应注意红细胞呈特异性凝集，继发性凝固及线状排列的区别。