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毛细管电泳仪的使用

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准备工作

1. 毛细管的制备:

① 剪略长于需要长度的毛细管(使用专用的裁剪纱布),断端利用镊子小心移除。

② 烧窗:从毛细管进液端开始到实验者需要长度的位置烧窗,窗口尽量小,过程中可用防护工具对窗口两端的毛细管进行防护,烧好的窗需用粘有酒精的棉花擦拭。

注:检测的有效长度为从毛细管进液端到检测窗之间的距离,这个距离一般根据实验者的需要自己掌握。

③ 取出卡槽:打开安放卡槽区域的门,旋转固定卡槽的杠杆90度,按卡槽中央的释放按钮,握住卡槽的两端向上抽出卡槽。

④ 安装毛细管:将进液端的毛细管小心的从卡槽的出口插入,进入时可轻轻旋转。当窗口到达检测点时停止插入,将游离的进液端毛细管从卡槽的入口引出,并固定好毛细管外端的橡胶管。

注:插入毛细管时小心操作,窗口位置的毛细管非常容易破裂,需格外谨慎,过程中切忌使用暴力。

⑤ 安放卡槽:用与取出的步骤相反顺序的操作安放卡槽。

2. 添加样品,缓冲液及冲洗液:

① 为了减少样品及缓冲液的挥发,在插入加液管前可在加样管固定器的小孔内加入少量的ddH2O。

② 已添加好的加液管,在插入转盘上的固定槽前先离心2min,加液时注意加样枪头紧贴管壁,防止气泡的产生。

③ 为了减少虹吸作用,需要保持入口处和出口处的running buffer量一致,对于500ul体积的加液管,推荐加入500ul的剂量;对1.5ml体积的加液管,推荐1.3ml的剂量。

④ 推荐加入样品的最小剂量为50ul,检测需要的最小剂量为15ul。

⑤ 在出口处的waste管中加入50ul的ddH2O,可以防止检测端的毛细管被冲洗液的残留污染。

电泳仪的操作

1. 插上电源,检查电泳仪的连接情况,检查制冷区小槽内水量是否充足,打开电脑,打开电泳仪的开关(两扇门都需要关闭),在电脑桌面点开BioFocus的图标,进入到BioFocus的控制界面。

2. 设置程序:

① 点击Reagents键,在已有的Reagents Data Base中查看是否含有需要使用的配液,有可点击该配液查看,或使用edit键进行修改;没有则点击add进行编辑添加。添加之后注意命名名称的唯一性。

② 点击Cartridges键,对卡槽的相关参数进行查看,修改。如Cartridges Data Base中没有和试验要求匹配的配置参数则点击Add进行添加。注意需要激活相应的或者设置的卡槽。

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