苏云金杆菌的部分生化试验鉴定

一、目的要求：

应用生物化学技术对昆虫病原细菌进行鉴定，乃是一种十分简便快速的方法，鉴定苏云金杆菌的生化指标是：V、P反应，卵磷脂酶，蛋白水解，吐温酶，水杨素，七叶灵、蔗糖、甘露糖、表膜、酶、淀粉、几丁质酶、精氨酸脱羟酶等。本实验是通过简单的生化测定来了解苏云金杆菌的生化鉴定技术。

二、实验材料：

天平、电炉、药勺、量筒、烧杯、pH试纸7、高压锅（手提式）、接种环

三、实验内容：

1. 各种糖利用：

蛋白胨 1%，琼脂 2%，蔗糖（甘露糖）1%，水杨素 0.5%，1%酸性复红水溶液 0.5%。

蛋白胨加热溶于水中，加入酸性复红水溶液。分别加入一种糖加热溶解，以不加糖的蛋白胨作对照。分装试管，调pH至7.58，灭菌30分钟。接种后于30℃恒温培养检查产酸情况，若培养基变红者为正反应。

2. 七叶灵利用：

牛肉膏 1%，七叶灵 0.5%，琼脂 2%，另配5%三氯化铁水溶液单独灭菌。

培养基溶后，先将三氯化铁每皿滴入2滴，后倒平板混匀。凝固后电接菌种，30 ℃培养3-5天。菌苔周围出现深褐色区为阳性反应。

3. 淀粉水解试验：

牛肉膏 5克，NaCl 5克，可熔性淀粉 5克，琼脂 10克，蒸馏水 1000毫升。

将试验菌点种于平板上，徒长出菌落后，收Lugoc氏碘液倾注于平板表面，菌落四周有透明圈者为阳性放应。

4. V、P反应：

蛋白胨5克，葡萄糖5克，NaCl 5克，蒸馏水 1000毫升；分装试管 30分钟灭菌。

接菌后于37 ℃培养24小时，每管加入4%KOH溶液10-20滴，再加等量的5%的一萘酚乙醇水溶液后，用力振荡。然后置37 ℃下保温0.5小时。培养物出现红色即为V、P正反应，并设未接种的试管为对照。

5. 卵磷脂酶试验：

蛋白胨1%，酵母膏 0.3%，NaCl 0.5%，琼脂 2%，卵黄2-3%， pH 7-7.2。

用75%酒精将新鲜鸡蛋进行表面消毒，并用经火焰灭菌的镊子将蛋两端各打一个孔，倾去蛋清，然后用无菌5ml吸管取出卵黄，加至触化后冷却至50。C左右的培养基中，使卵黄含量为培养基总体积的2~3%。混匀后倒平板，点接菌种24小时后观察，菌液边缘出现混浊圈者表示卵鳞酯酶为阳性。

6. 菌膜形成试验：

肉汤试管接种，30℃静止培养24小时后观察菌膜形成情况及摇动后膜破粹情况。