核酸疫苗接种方法

1. 注射法

医用注射器是最简单和最常用的接种工具。由于骨骼肌细胞并非唯一可以摄取DNA疫苗组分的，根据疫苗的性质特点也可选择其他途径的注射方式，如静脉注射、皮内注射、皮下注射、腹腔注射等。

2. “无针头”注射导人系统

“无针头”注射装置是一种强力喷射系统，即在高压下使接种物形成细流喷射而出，可穿越组织和细胞。当DNA从该装置中喷出时，DNA在高压下可能发生断裂。研究发现在接种后线性和小片段DNA数量增加，故导人机体后的目的基因表达量不高。

3. 局部黏膜吸收法

DNA 疫苗分子直接对皮肤黏膜局部渗透、鼻黏膜、肠黏膜吸收。

4. 基因枪导人系统

DNA分子吸附于用金或钨颗粒等颗粒载体，结合特殊装置，通过空气动力产生高压撞击力使金属―疫苗分子颗粒高速射向表皮细胞或靶细胞。基因枪基因导人系统操作简单，基因转移效率高(远高于其他基因导人方法)。靶组织可以是任何细胞、组织或器官。

基因枪可分为气动式基因枪和电动式基因枪，目前以气动式基因枪较常用。由于金弹的直径通常只有0．5―0．9um(小于细胞直径)，因而可被直接射人细胞质中。即使金弹只是停留在细胞间隙，它们也可作为异物而诱导皮下的抗原呈递细胞将其吞噬。

基因枪导人法主要诱导细胞免疫而非体液免疫，这与基因枪导人的DNA较少有关。

5. 电脉冲导系

原理是高电压和低电流脉冲刺激可引起细胞膜电荷变化而导致细胞膜通透性增加，促进外源基因进入细胞内。该法的基因转移效率与基因表达效率非常之高。实验表明肌肉经DNA接种后行脉冲刺激，质粒DNA的摄取和表达水平可提高100倍以上，也就是说接种一次即可达到理想的免疫效果，也可降低疫苗的接种量(低至lug)。

6. 脂质体导人系统

某些脂类物质和细胞膜脂类结构可以相互交联和融合，包埋于脂质体的DNA疫苗分子微球颗粒很容易通过细胞膜，进入细胞也不需通过溶酶体。

带正电荷的脂质体与带负电荷的DNA之间可以形成稳定的复合物，这种复合物与细胞膜结合后通过内吞作用把DNA摄人细胞。脂质体导人系统可载人大小不等的DNA分子，具有安全、简单的特性；脂质体本身是一种免疫佐剂，可以诱导机体对抗原表位产生免疫应答。但脂质体对细胞有一定的毒性，转染效率不高，成本较高。

经脂质体包埋的DNA疫苗分子可用于皮下、皮内、肌肉、腹腔、鼻腔内等多种接种途径。实验证明，脂质体―DNA复合物能诱导出比单DNA接种更高的特异性抗体应答，迟发型超敏反应细胞毒性T细胞活性显著。

目前常用的脂质体有Lipofectin和LipofectAMINE，其他阳离子脂质体如3β[N-(N’，N’，―二甲基氨基乙烷)氨甲酰基]胆固醇与二油脂酣磷脂酣乙醇胺氯仿溶液的混合物。

7. 细菌导人系统

通过胞内寄生的减毒细菌将DNA疫苗分子导人宿主细胞内是切实可行的。细菌携带的质粒进入宿主细胞的吞噬泡或胞质内，可释放出目的DNA疫苗分子进入细胞核，继而表达特异性抗原，诱导机体产生保护性免疫力。

目前常用的细菌有侵袭性减毒的伤寒菌、副氏志贺菌、李斯特菌等。虽然这些减毒细菌可有效呈递DNA分子，但对宿主也存在着危险性，如细菌毒素的毒性作用以及减毒体毒力回归性变易等。

8. 其他导人系统

如利用病毒(如流感病毒)呈递DNA疫苗分子、阳离子乳化剂―质粒DNA系统、生物降解性多聚物微球导人系统、体细胞转基因导人系统等，均能达到较高水平的转导效率和对宿主的安全性。