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瓷珠保藏法

&海博生物

4109


1 设备与材料
1.1 低温冰箱:-70℃
1.2 高压灭菌器。
1.3 多孔玻璃珠(或素烧瓷珠):直径2~3 mm。
1.4 商业化细胞冻存管(可选)。

2 操作步骤
2.1 将直径为2-3 mm 的瓷珠分装到小螺旋帽瓶中(每瓶最多装30 粒)制成冷冻管,高压灭菌。
2.2 标记冷冻管。
2.3 在无菌状态下打开冷冻管。
2.4 在所保藏菌种的最适营养条件下将细胞培养至稳定期或成熟期,进行纯度检查后,将菌株新鲜培养物加入到培养基中制成混悬液,无菌操作将混悬液转入到冷冻管中。
2.5 封好冷冻管并颠倒四至五次乳化菌种培养基混悬液,切勿涡旋振荡。
2.6 菌种吸附于瓷珠上后,将多余的混悬液吸出。
2.7 也可使用商业化的细菌冻存管,此时应按照产品说明书进行操作。

3 保藏
将冷冻管存于-70℃。

4 保藏周期
可保存10 年。

5 恢复培养
5.1在无菌条件下打开冷冻管,用无菌真或接种环取出一粒瓷珠,封好冷冻管并尽快将其送回低温条件下保存。
5.2 菌种瓷珠可直接接种于固体培养基或适量的液体培养基中。

6 注意事项
注意事项包括:
a 为使菌种长期稳定保存,在冷冻管使用过程中要注意无菌操作。
b 在生物安全柜中进行菌种保存和复苏等操作。
c 在处理应用过的冷冻管时应注意生物安全。

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