血清中肌酐的检测方法及其进展
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肌酐，学名甲基胍基乙酸内酰胺，其相对分子量很小，属于极性有机含氮化合物的一种[1]。机体肌肉中肌酐由磷酸肌酸不可逆转化或自发性的形成。
在正常条件下，人体中肌酐水平相对稳定，通常其水平范围为3.0-14.0 mg/L。当肾脏机能受到损伤时，肌酐的正常排泄功能受到一定阻碍，血清内肌酐水平升高。所以，血清内肌酐水平是体现肾脏功能的一项重要指标。现针对血清内肌酐的检测方法进行深入了解，综述如下。
1.检测方法
1.1 Jaffe 检测法
Jaffe就是碱性苦味酸肌酐反应，早在1886年便有研究发现苦味酸、肌酐在碱性环境中发生反应时，可产生一种红色物质。Green-wold通过试验Jaffe反应观察发现[2]，这种红色产物是肌酐与苦味酸之间反应产生的1:1、1:2的络合物。
有的肌酐衍生物或同系物，例如乙内酰脲、胆红素、丙酮酸等物质可与苦味酸相互反应，统称为假肌酐，可导致血清肌酐的检测结果偏高，由于血清红细胞中含有大量的假肌酐，所以肌酐检测不宜选用全血。
随着自动化设备的普及应用，人们对Jaffe 反应试验进行了许多改进[3]，以利于提高检测结果的准确性，同时实现自动化分析，但是仍然没有从根本上解决非特异性反应的问题，血清内血红蛋白、抗坏血酸等物质对反应有所影响，导致结果偏低或偏高。
Junge等人又对Jaffe进行了进一步改良[4]，通过气相色谱一同位素稀释质谱法对大量混合血清标本进行了检测，结果发现为了达到与酶法的相似结果，一定要用21.0 ?mol/L对该法给予补偿校正。
1.1.2酶法
酶法检测血清内肌酐是通过肌酐在过氧化物酶、肌氨酸氧化酶、肌酸脒基水解酶、肌酐氨基水解酶等酶、显色剂与氧、水共同作用下产生红色的醌亚胺[5]，用505 nm波长检测其吸光度A，吸光度A值的大小与标本内肌酐水平呈正比的原则进行设计。
试验的主要干扰物为标本内含有的肌酸，可通过双试剂将肌酸去除掉。酶法避免了Jaffe 法特异性较差的特点，具有非常强德尔抗干扰能力，不会产生试剂毒性，更适合用于自动分析仪检测。但是，上述方法中大部分内源或外源物质对血清内肌酐的检测造成一定干扰，或是实验试剂稳定性差。
1.1.3毛细管电泳法
毛细管电泳是近几年才引进试验的一种仪器分析方法，具有自动化程度较高、样品用量较少、分析速度较快、分离效率较高等特点[6]。毛细管电泳法检测中，血清只需要进行过滤，便可直接置入含有二氧化硅的毛细管柱内。
通过磷酸缓冲溶液（溶液PH值为2.3），浓度为75.0 mmol/L，环境温度为15摄氏度。与其他毛细管电泳法相对比，这种方法更加快捷、经济，回收率可达99.0%，批内相对标准偏差约为3.59%，批间相对标准偏差约为5.91%。但是，毛细管内壁有时会残留微量的蛋白质，致使检测结果的重复性比较差。
1.1.4拉曼散射法
拉曼散射法与同位素稀释质谱法相似[7]，将银胶体粒子作为表面增强拉曼散射法的一种基质。
试验前应用0.02 mol/L的氯化钠溶液将银胶体粒子诱导产生一些聚集。将20 u肌酐溶于标液放在一个标准石英池内，并且认真振摇，确保样品彻底混合均匀。
检测结果的标准偏差低于2.0%。这种方法的优点在于不需要费用较高的质谱，还能够用于检测含硫、氮等特殊官能团的物质。
1.1.5同位素稀释质谱法
（1）GC-ID/MS 法：早在1986年，美国便将GC-ID/MS检测血清肌酐水平的方法作为国家标准[8]。在GC-ID/MS检测分析中，需要对样品进行预处理，把肌酐内的肌酸去除，例如衍生化、离子交换等。所以，样品的前处理相对复杂、所用时间较长、成本较高。人们经大量试验进一步发展了LC-ID/MS，该方法样品的预处理相对简单，通常只需要沉淀或过滤蛋白质，便可直接应用液相柱，有效分离肌酐与肌酸。
（2）LC-ID/MS法：近些年，美国LGC首次通过LC-ID/MS检测参与了IMEP-17/CCQM-K12的国际比对[9]，结果收效甚好，不确定度在0.5%以下。LC-ID/MS检测法与GC-ID/MS法相对比，样品的预处理比较简单，只需进行离心、沉淀蛋白质即可，过滤后便能够直接进样予以样品分析，同时该法的偏差可与GC-ID/MS相提并论。
2.总结
根据GC-IS/MS、LC-ID/MS检测方法的发展可知，美国、欧盟等国家对于机体血清内肌酐水平的参考方法与决定方法开展了大量的深入研究[10]，同时获得了较大进展。其中，肌酐的定值方法已经确定气质、液质两种同位素稀释质谱法。
国内临床检验量值应该还处于基础研究，与美国、欧盟等国家的研究水平还相距甚远。我国卫生部临检中心、国家标准物质研究中心也逐渐开展了相关的试验研究。现阶段，在全球改进医学检测准确度、建立全球统一的体外诊断参考体系的情况下，制定我国的参考系统势在必行。
在常规检测方法中肌酐亚胺水解酶法，与肌氨酸氧化酶法具有较宽的线性，且不受常用药物、溶血、乳糜、胆红素、维生素C的影响，具有操作方便、特异性高、省时省力等优点，可作为目前血清肌酐检测的首选方法。
参考文献
[1]戴新华.血清中肌酐的液相色谱-同位素稀释质谱法测定[J].分析测试学报,2011,27(1):84-86.
[2]全灿.液相色谱-同位素稀释质谱法准确测定血清中的肌酸酐含量[J].质谱学报,2011,27(3):135-139.
[3]程武,连国军.血清肌酐测定方法学进展及其评价[J].中国保健,2011,22(15):247-248.
[4]戴新华,徐锐锋,张春梅.血清中尿酸的测定方法及其研究进展[J].2011,12(4):446-447.
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[9]谢继光,蒙凯.血清肌酐测定方法的研究[J].临床和实验医学杂志,2011,12(20):461-462.
[10]邹燕,陈梅,冯彩莲.两种血清肌酐测定方法的评价[J].宜春学院学报,2011,22(4):121-122.
作者：吴汉项
