多糖纯化，方法对了也可以带点甜~

叫糖的不一定都是甜的，还有可能糟心。别担心，这篇多糖纯化技巧教你的纯化实验也可以带点甜。

多糖广泛分布于自然界的多种生物体内，尤其是动物细胞膜，植物细胞壁以及微生物细胞壁中，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，是构成生命体的重要分子基础。

根据来源可以被分为动物多糖，植物多糖和微生物多糖三种类型。
动物多糖
动物多糖常见的有甲壳素、肝素、硫酸软骨素、透明质酸等，也是医学和美容保健界的万金油，在临床研究中发现对抗凝、降血糖、抗氧化、肿瘤、免疫疾病都有一定的治疗效果。
植物多糖
植物多糖具有多种生物活性，最为人们所熟知的就是免疫调节、抗肿瘤、降血糖等保健作用，市面上有着多种多样的植物多糖保健品比如枸杞多糖、海藻多糖，各种中药多糖等最为普遍。
微生物发酵多糖
微生物发酵多糖以黄原胶、右旋糖苷为代表的产品已经在石油化工、制药、食品等工业领域占据相当的市场份额。而真菌多糖比如灵芝多糖，虫草多糖等则是养生保健的明星产品。

Cytiva 有着多年的经验积累，可以为你的多糖纯化提供诸多优秀的解决方案。下面我们就以动物多糖和疫苗多糖为例，为大家介绍多糖的纯化策略。

贻贝多糖-海洋生物中过敏源多糖的纯化

样品前处理：海洋软体动物肉拨出洗净搅碎。

粗提：酶法处理并用 Sevage 法脱去大量的蛋白质。

层析纯化：

1. 使用凝胶过滤层析进行初步分离，本例中使用的是 Sephacryl S-300，分离范围为 10KDa-1500KDa。可去除分子量差异较大的蛋白或核酸杂质，不同聚合度的多糖分子也可以得到有效分离。
2. 选择 Capto Q 阴离子交换层析作为精细分离。多糖分子带有负电，因此选择高流速高载量的 Capto 系列阴离子交换填料分离效果更佳。

检测：采用适当的方法对免疫多糖进行检测。

肺炎多糖结合疫苗中肺炎多糖的纯化
肺炎球菌感染在世界范围内引起肺炎、脑膜炎、中耳炎等，每年有超过 40-50 万人因此死亡，病死率约为 1%-10%，海内外多家大型药企在此领域投入了大量的研发经费。

多糖结合疫苗的纯化通常分为三部分：

• 一是多糖制备
• 二是载体制备
• 三是多糖蛋白偶联物分离

后面两部分在此不进行展开。

传统多糖纯化工艺使用苯酚，毒性大、收率低且工艺耗时长。而层析工艺对环境友好并能保证操作人员的安全和健康、收率大大提高且流程简单容易放大。

层析工艺流程：

• 10% 脱氧胆酸钠处理后的粗糖样品进入层析工艺。
• 使用 Capto DEAE 和 Capto adhere 层析柱进行一至二步层析纯化，使用简单的流穿模式，可以很好的分离多糖和杂质。
• 最后使用 Sephadex G-25 进行脱盐。

工艺优势：

• 与传统工艺相比，收率可以提高 30%-50%。
• 工艺效率高，从样品制备到脱盐后的产品只需一周时间。
• 纯化产品质量符合欧洲药典标准。

Capto adhere 和 Capto DEAE 都是 Capto 骨架的填料。DEAE 是弱阴离子交换配基，而 adhere 是多模式配基，兼具强阴离子交换和疏水配基，为纯化工艺提供更多的选择性。而流穿模式可以使多糖流穿而带负电的杂质结合在柱子上，从而达到快速除杂的目的。

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