高脂饲料诱导大鼠建立非酒精性脂肪肝模型

非酒精性脂肪肝（NAFLD）包含了一系列的疾病发展阶段，从一般脂肪变性进展到脂肪变性与炎症并发的非酒精性脂肪肝炎（NASH），随后进展为肝纤维化、肝硬化和肝癌。大多数肥胖的成年人有脂肪肝型态，他们的患病率达到 30% 以上，因此，NAFLD 的患病率会随着肥胖率的升高而升高。
 

为研究 NAFLD 的发病机制并找出治疗方法，建立动物模型是至关重要的一步。科研人员大多利用高脂饲料诱导大鼠建立 NAFLD 模型，但近几年建立的 NAFLD 动物模型所采用的高脂饲料配方、建模周期均不一致，在研究方面具有不同的参考价值。本文对多种高脂饲料诱导大鼠建立 NAFLD 模型的方法进行总结，如有疑问，欢迎与我们的技术团队讨论。
 

饲养环境
 

环境是饲养实验动物的必要条件之一，对于实验动物的成活率有着很大的影响，在相关论文中对温度和湿度几乎都有详细叙述，并强调了它的重要性。考虑到 NAFLD 模型对环境并无特殊要求，所以科研人员一般采取了 22±2℃，湿度 50%-60%，12 小时循环照明的普通饲养环境。
 

不过值得注意的是，大鼠对于环境的变化很敏感，因此要保证饲养环境各项指标的稳定。同时由于高脂饲料的缘故，大鼠的排泄物异味更重，需要及时更换垫料，饲料和饮水也需要灭菌处理，以免对实验造成不必要的影响。
 

实验大鼠的选择

作为实验的受体，大鼠的选择十分重要，这不仅关系到实验成本，也决定了建模的质量及周期。
 

清洁级别
 

对于大鼠的清洁级别选择，综合多篇参考文献，即便使用普通动物，对实验结果也没有明显影响，但考虑到降低大鼠死亡率和实验成本，清洁级别越高的大鼠无疑是越好的。
 

种类选择
 

对于实验大鼠的选择主要有 Wistar 大鼠和 SD 大鼠。其中 SD 大鼠相对发育更快，适应能力更强，更利于建模；缺点是价格较高，性格更凶猛。综合考虑，我们认为 SD 大鼠仍然是更好的选择，但如果预算较少也可以选择前者。
 

性别选择
 

在查阅参考的十多篇文献中，科研人员无一例外的选择了雄性大鼠。由于成年的雌性动物代谢存在着明显的周期性，这可能会对实验造成影响，所以在大部分实验中，科研人员更倾向于选择雄性大鼠进行实验。
 

体重选择
 

成年大鼠的体重可达 300g，考虑到实验时间一般为 8-12 周，我们认为选取 5-6 周，即 120g-200g 的大鼠比较合适。值得注意的是，大鼠之间的体重差异必须小于 10%，以免引入无关的变量，对实验结果造成干扰。
 

高脂饲料配方
 

高脂饲料的配方无疑是 NAFLD 建模最关键的因素之一，合适的高脂饲料可以实现低死亡率低，快速建立模型的目标。以下我们将对于高脂饲料的配方进行详细探讨。
 

猪油含量
 

猪油含量是高脂饲料的核心，更高的猪油含量可以快速建立 NAFLD 模型，但会影响大鼠食欲及死亡率；猪油含量过低则会造成建模周期长，症状不明显。在《高脂血症非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中，科研人员虽然采用了 42% 猪油含量的高脂饲料在第 8 周建模成功，但个人认为并不可取，因为如此高的猪油含量会大幅度提高大鼠死亡率。我们建议使用 10% 猪油含量的高脂饲料，可以在 12-16 周得到症状较明显的 NAFLD 模型，而且在环境适宜的情况下，通常不会有大鼠死亡。如果要缩短建模周期，可以适当提高猪油含量，但需要加入其它物质来促进吸收。
 

其它物质
 

由于高脂饲料在适口性方面不如常规饲料，会导致大鼠采食量下降，在一些实验中甚至出现了实验组大鼠体重低于对照组的情况。所以很多研究人员在高脂饲料中添加了胆盐（1%），以提高大鼠食欲，促进消化吸收。同时也可以在饲料中添加胆固醇（1%-5%），以促进脂肪肝的形成，缩短建模周期。
 

建模周期
 

建模周期和许多因素相关，不能一概而论。例如高脂饲料中的猪油含量对建模周期的影响就非常大。以下我们将讨论使用 10% 猪油含量饲料前提下所需的建模周期。
 

在《高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中，研究人员在 8 周停止建模，解剖大鼠，表明建模成功，但症状较轻，大部分大鼠处于轻度和中度肝炎。而上文提到的研究中，建模时间长达 16 周，但症状明显，大部分大鼠处于中度和重度肝炎。综上所述，可以证明 12-16 周是比较合适的建模周期，具体时间可结合需要选择。
 

木棒磨牙
 

在《非酒精性脂肪肝动物模型的建立与思考》中，科研人员考虑到高脂饲料质地偏软，所以为实验组大鼠提供了木棒磨牙，结果确实提高了大鼠存活率，体重也是实验组高于对照组的理想状况。
 

剔除肥胖基因抵抗大鼠
 

《高脂饮食诱导肥胖与肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》一文中探讨了肥胖抵抗基因大鼠对于建立 NAFLD 模型的影响。实验结果表明，在同样的饲养条件下，肥胖抵抗基因大鼠的症状确实轻于普通大鼠，这不利于 NAFLD 模型的建立，所以在实验前应当将其剔除。
 

总结
 

高脂饲料诱导大鼠建立 NAFLD 模型，应选择 120-200g 的雄性 SD 大鼠，剔除肥胖抵抗基因大鼠；环境温度应控制在 22℃左右，湿度 50%-60%；喂养 10% 猪油含量的高脂饲料，可添加胆盐和胆固醇，在 12-16 周基本可以建模成功。