献给初学者：如何阅读质粒图谱？

今天来给大家讲解一下如何阅读质粒图谱，底部还有质粒、酶切切点选择的相关教学视频。

一个合格质粒的组成要素

● 复制起始位点：Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。

● 抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+。

● 多克隆位点 MCS：克隆携带外源基因片段。

● P/E 启动子/增强子

● Terms 终止信号

● 加 poly（A）信号：可以起到稳定 mRNA 作用

如何阅读质粒图谱

第一步：首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）。

第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。

● Ampr 水解 β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。

● tetr 可以阻止四环素进入细胞。

● camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。

● neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶 使 G418（长那霉素衍生物）失活。

● hygr 使潮霉素 β 失活。

第三步：看多克隆位点（MCS）。

它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。

质粒一般只能容纳小于 10 Kb 的外源 DNA 片段。一般来说，外源 DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。

第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。

这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。

● 启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动子本身不被转录。

● 增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子－负增强子，负调控序列。

● 核糖体结合位点/起始密码/ SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA 有核糖体的两个结合位点，对于原核而言是 AUG（起始密码）和 SD 序列。

● 转录终止顺序（终止子）/翻译终止密码子：结构基因的最后一个外显子中有一个 AATAAA 的保守序列，此位点 down－stream 有一段 GT 或 T 富丰区，这 2 部分共同构成 poly（A）加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个 AATAAA 的保守序列，此位点 down－stream 有一段 GT 或 T 富丰区，这 2 部分共同构成 poly（A）加尾信号。

第六步：质粒图谱上的箭头。

有的箭头顺时针有的箭头逆时针，那其实是代表两条 DNA 链，即质粒是环状双链 DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上。