高粱籽粒中单宁含量的测定

最新修订时间：2022-02-10

简介

单宁通常被认为是一些水溶性的多酚类化合物，其分子质量为 500〜3 000 ku0 单宁除了具有酚类化合物的性质以外，还能沉淀生物碱、明胶和蛋白质等。单宁存在于许多植物的根、茎、叶、花和果实中，且与水果成熟前后的涩味密切相关。同时也发现在大麦、小麦和多种食用豆类作物的籽粒中也含有单宁。测定单宁含量可以了解果蔬、作物品质。

原理

高粱籽粒中单宁含量的测定的基本原理是根据单宁含有能还原磷鸨钥酸的芳香族羟基，在碳酸钠介质中，能将显色剂的 6 价鸨（钥）还原成 5 价，显现出钙（钥）深蓝色，其颜色深浅与单宁的含量成正比。本实验浸提高粱中的单宁类化合物，在碳酸钠溶液中，与磷鸨钥酸反应，产生深蓝色物质，测定单宁的含量。

材料与仪器

1. 材料：高粱籽粒。

3. 器材：恒温水浴，恒温箱，容量瓶，离心机，移液管，烧杯. 漏斗，分光光度计。

2. 试剂：

（1） F-D（Folin-Denis）试剂：1 000 mL 烧瓶中加 750 mL 蒸偕水，再加入 Na₂WO₄• 2 H₂O 100 g、磷钥酸 20 g 及 H₃PO₄（85%）50 mL, 用橡皮塞塞紧，塞中插一支干净的长 50〜100 cm 细玻璃管, 玻璃管下端插入溶液，将烧瓶置于可调电炉上（加石棉网），并固定在铁架上，温火煮沸回流 2 h, 冷却后用蒸偕水稀释至 1 000 mL。

（2）饱和 Na₂CO₃ 溶液。

（3） 0.1 mg - mL・单宁酸贮备液：精确称取单宁酸 10 mg 溶于蒸馋水，然后定容至 100 mL, 现用现配。

步骤

高粱籽粒中单宁含量的测定的基本过程可分为如下几步：

1. 标准曲线的绘制：吸取新配制的 0.1 mg - mL-1 的单宁酸贮备液 0、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0 mL 分别装于 100 mL 容量瓶中，然后加入 5 mL F-D 试剂及 10 mL 饱和 Na₂CO₃ 溶液，蒸馅水定容至 100 mL, 并充分摇匀。30 min 后，用分光光度计在 760 nm 波长处读取光密度值。以光密度值为纵坐标，单宁酸量为横坐标，绘制标准曲线。

2. 样品提取：手工精选整粒高粱样品，除去颖片、碎粒及杂物。称取样品 5 g, 装于 100 mL 烧杯中，加水约 50 mL, 放在 60°C 左右的保温箱中过夜。第二天，将上清液过滤至 250 mL 容量瓶中，然后再加入约 40 mL 80°C 左右的蒸馅水，置于 80°C 水浴中浸提 20 min, 将滤液过滤至上述 250 mL 容量瓶中，如此反复 3〜5 次，直至提净为止（检查方法：最后一次滤液与 FeCl3 稀溶液混合不再产生绿色或蓝色）。最后定容至 250 mL, 摇匀。

3. 样品测定：取出一部分浸提液离心，吸取 1 mL±清液，置于预先盛有 70 mL 蒸偕水的 100 mL 容量瓶中，加入 5 mL F-D 试剂及 10 mL 饱和 Na₂CO₃ 溶液，蒸儒水定容至 100 mL, 并充分摇匀。30 min 后. 用分光光度计在 760 nm 波长处读取光密度值。

4. 结果计算：
单宁含量=霁■陽 XI。。％
式中：A—从标准曲线查得的单宁酸量，mg；
W—样品重，g。

注意事项

1. 使用碳酸钠时，如果显色液出现乳白色浑浊或者沉淀，比色前应离心。

2. 若改用 NaOH 做介质时，也要消除浑浊、沉淀现象。

来源：丁香实验